0.25%胰蛋白酶溶液 胰酶细胞消化液（1×）不含EDTA

自备材料：

PBS、Hanks液或无血清培养液
显微镜
离心机
 
操作步骤(仅供参考)：

1、贴壁细胞的消化

①吸除培养液，用无菌PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量Trypsin solution，略盖过细胞即可，室温放置0.5～2min，不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入Trypsin solution重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g离心1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。

2、组织的消化
不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
 
注意事项：

尽量减少反复冻融的次数，以免失效。
在Trypsin solution过程中，要特别注意避免消化液被细菌污染。
Trypsin solution消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。