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- 再康生物
- ZK-0048413
- 中国
- 2025年11月20日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
0.25% Trypsin Solution without EDTA
- 保质期：
有效期18个月
- 供应商：
上海再康生物科技有限公司
- 保存条件：
冰袋运输，-20℃保存，有效期18个月，建议分装冻存，避免反复冻融。
- 规格：
100mL;500mL
自备材料：
PBS、Hanks液或无血清培养液
显微镜
离心机
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量Trypsin solution，略盖过细胞即可，室温放置0.5～2min，不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入Trypsin solution重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g离心1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化
不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
注意事项：
尽量减少反复冻融的次数，以免失效。
在Trypsin solution过程中，要特别注意避免消化液被细菌污染。
Trypsin solution消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验问：请问哪位仁兄能告知一下EDTA-胰蛋白酶的配制。急用！多谢！答：1、胰酶是0.25%,这是质量体积比，就是说0.25g胰酶溶于100ml PBS,注意，尽量不要用水来溶，因为要保持渗透压。2、EDTA的工作液溶度是0.02%－0.1%，根据细胞消化的难易程度自己调整。EDTA并不是必须的，容易消化的细胞可不加。EDTA对细胞贴壁性有影响，因此使用时要甚重。如果影响贴壁，但消化时必须要用，那么在用完全培养基终止消化后，可离心弃上清，再加完全培养基培养，可去除EDTA。如果对贴壁没
。其所显示的染色体带纹清晰，普通显微镜下可以分辨，标本可长期保存，因此被广泛应用。实验步骤（以下以贴壁培养细胞为例）一、实验准备1）细胞完全培养基：根据细胞类型和实际需要确定2）细胞消化液：0.25% Trypsin-EDTA3）磷酸缓冲液（PBS）：pH7.44）秋水仙素（或者秋水仙胺）溶液：20 μg/mL5）低渗液：0.075 M KCl 溶液6）固定液（新鲜配制）：甲醇：冰醋酸 = 3：17）Giemsa 染色液：先配置 1% Giemsa 原液（以甘油，甲醇配制），再以 PBS 稀释 10 倍
，Rb，TopoismeraseⅡ 等。 2、酶消化方法 常用 0.1% 胰蛋白酶和 0.4% 胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前预热至 37℃，切片也预热至 37℃，消化时间约为 5~30 分钟（胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从 0.05% 至 0.25% ）； 胃蛋白酶消化37℃ 时间为 30 分钟。皂素（Saponin）：一般使用浓度为2~10mg/ml的saponin 溶液，消化时间为室温孵育 30 分钟。 适用于被固定遮避的抗原，其中有：Collagen
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