Rabbit CD73/5'-Nueleotidase EL

参数规格：

产品名称	Rabbit CD73/5'-Nueleotidase ELISA Kit说明书
英文名称	Rabbit CD73/5'-Nueleotidase ELISA Kit
货号	YS-D4012

产品名称：Rabbit CD73/5'-Nueleotidase ELISA Kit说明书
中文名称:兔胞外5'-核苷酸酶酶联免疫试剂盒
英文名称:Rabbit CD73/5'-Nueleotidase ELISA Kit
反应性:Rabbit
样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
检测范围:56-3600 pg/ml
灵敏度:11 pg/ml
检测目标:CD73/5'-Nueleotidase
应用:Sandwich ELISA
使用方法：
1. 对于培养细胞样品
(1) 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF (CAT:AP02L014)，使PMSF的终浓度为1 mM。
(2) 细胞裂解
对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2 s后，细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，按照6孔板每孔细胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液，混匀，充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，需分装成50~100万细胞/管，然后再裂解。具体RIPA裂解液的使用量参照表2。
(3) 充分裂解后，10000~14000 rpm离心3~5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
2. 对于组织样品
(1) 把组织剪切成细小的碎片；
(2) 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM；
(3) 按照每20 mg组织加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量，具体RIPA裂解液的使用量参照表2。
(4) 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
(5) 充分裂解后，10000~14000rpm离心3~5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意事项：
1、本试剂为强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，造成细胞裂解液粘稠，此时可以直接加入蛋白上样缓冲液，煮沸再离心，离心后直接上样电泳;若想测定浓度，可入加少量SDS(1%)，煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。
2、如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清用于后续实验。
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