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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
36
- 英文名:
Rabbit anti-Chicken IgG/HRP
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
储存条件: -20°C
- 规格:
瓶
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产品名称:兔抗鸡IgG-HRP
英文名称: Rabbit anti-Chicken IgG/HRP
储存条件: -20℃
单位: 支
酶标记抗体,是一类广泛用于免疫学、分子生物学及临床医学的各个分支学科中的特异、敏感和安全的免疫化学制剂。目前较为常用的是将辣根过氧化物酶(HRP),经过钠氧化而标记在抗体IgG分子上,而制成HRP—抗体结合物。公司向用户提供的各类酶标物,均根据本公司建立的改良过钠氧化法标记而成。每种成品已加入一定浓度的BSA作为稳定剂。产品的工作浓度根据方法不同而别,用前最好-20℃冻存,避免反复化冻。
应用范围:
抗原决定族的抗原性分析鉴定,各种抗原、抗体的定量、定性及定位分析测定等。
工作中易产生的问题:
2.用抗血清不纯化,或纯化程度太低的抗体包被,则阳性值较小,或没有阳性梯度。
3.封闭不好或标记物过浓可产生对照较高。
主要性能:
每支0.1ml液体,内含有HRP约200μg/支,IgG约含400μg/支,BSA300μg/支,-20℃保存,稳定一年。4℃保存约3~6个月,1:10稀释,4℃可30天左右。稀释液为:pH7.4PBST。
工作效价:
直接ELISA法:1:500~1:1000,用TMB作底物(OD450nm)P/N=2.5~3.0为阳性。
免疫印迹法:1:200~400,免疫组化:1:20~40,斑点免疫1:200~400。
备注:产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。
| 产品名称 | 兔抗鸡IgG-HRP |
| 英文名称 | Rabbit anti-Chicken IgG/HRP |
| 货号 | BH-DB1061 |
操作步骤:
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂, 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
2. 每100mg固体组织置于培养皿中,手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
3. 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管,离心10000转/分,4℃离心5 min;
4. 取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1. 贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液;
2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中, 1000转/分离心10 min,再用10mL/150mm培养板的冷PBS,1000转/分离心5 min洗两次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂, 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
4. 细胞洗涤后,转至新的预冷的离心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
| 细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
| 107个 | 0.5 mL~1 mL |
| 5×106个 | 0.2 mL~0.5 mL |
6. 14,000rpm,4℃离心15min,取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
固定液的应用:
1.单纯固定液(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以pH7 2~7 4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封…
1.单纯固定液
(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以 pH 7.2~7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处,保存时间不 超过一个月。
(2)乙醇固定液:使用时以80%~95%的浓度为宜,具有硬化、固定、脱水等作用,对组织渗透力较弱,因此很少单独使用,但其保存组织中的核酸强于中性甲醛,故常用于有核酸操作的实验或检查,如果用于证明尿酸结晶和保存糖原,可用100%乙醇固定组织。
(3)4%的多:主要用于培养细胞的固定。
2.混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇-福尔马林,AF)固定液:适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用,固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。
(3)Bouin固定液:特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀,收缩很少,不会使组织变硬变脆。需现配现用。
(4)Carnoy固定液:穿透能力强,可很好的固定细胞质和细胞核,特别适合于固定外膜致密的组织,亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
(5)Zenker固定液:经此液固定的标本,细胞核和细胞质染色颇为清晰,但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光,以免引起化学变化而失效
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文献和实验和第3支空试管中,然后往第2支试管中加0.1ml抗HRP,往第3支试管中加0.1mg/ml HRP 0.1ml; 5. 混匀,在室温放1h后观察。如第2支试管中产生沉淀,说明其对应的第1支反应管中抗原过量;如第2支试管中不产生沉淀,而第3支试管中产生沉淀,说明其对应的第1支反应管中抗体过量; 6. 制备PAP时,HRP的浓度应选取抗原过量管的前一管。 [附注2] 兔(或羊)抗HRP的制备 1. 兔抗HRP的制备:取HRP1mg溶于生理盐水中,加弗氏完全佐剂1ml充分乳化
1材料和试剂:1.1.1包被液:碳酸盐缓冲液,PH9.61.1.2洗涤液:PBS-Tween20,PH7.41.1.3稀释液:0.5%BSA-PBS-Tween20,PH7.41.1.4底物缓冲液:柠檬酸-磷酸盐缓冲液,PH5.01.1.5底物液:邻苯二胺8mg溶于底物缓冲液20ml,30%H2O230ul1.1.6终止液:1mol/LH2SO41.1.7兔抗大肠杆菌抗体1.1.8 HRP酶联兔抗大肠杆菌抗体1.1.9菌体蛋白标准:中国药品生物制品检定所提供,(10ug/ml)1.2. 仪器
μg/μl) 10. 加入一定体积的兔抗到500μl总蛋白中,抗体的稀释比例因兴趣蛋白在不同细胞系中的多少而异 11. 4℃缓慢摇动抗原抗体混合物过夜或室温2h,激酶或磷酸酯酶活性分析建议用2 h室温孵育 12. 加入100μl Protein A琼脂糖珠来捕捉抗原抗体复合物,4℃缓慢摇动抗原抗体混合物过夜或室温1h,如果所用抗体为鼠抗或鸡抗,建议加2 μl“过渡抗体”(兔抗鼠IgG,兔抗鸡IgG) 13. 14000rpm
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