植物RNA提取试剂盒 Plant RNA Kit

植物RNA提取试剂盒 Plant RNA Kit
产品简介
 
Plant RNA Kit可以快速简便地从广泛的植物及真菌中提取到高质量的细胞总RNA。最多100mg 湿的组织可以在1小时内处理完毕。可以有效的去除组织裂解物种的多糖，酚类，以及酶抑制物。可以同时进行多个样品的处理。
 
 
试剂盒组成
   
储存和稳定性
 
Plant RNA Kit在购买后可保存至少12个月；所有组分储于室温（22-25℃）。RNAplus加入巯基乙醇后请于4℃保存,有效期为6个月。
 
 
预防RNase 污染，应注意以下几方面：
 
z 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。
 
z 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
 
z RNA 在RNAplus-巯基乙醇中时不会被RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不含 RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在1500C烘烤4 小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
 
z 配制溶液应使用RNase-free ddH2O。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC 至终浓度 0.1%( v/v)，混匀后放置过夜，高压灭菌）。
 
 
浓缩的RNA Wash Buffer需用无水乙醇按如下稀释：
 
z 50T加入52 ml ；100T的每瓶加入104 ml 无水乙醇。
 
 
RNAplus使用前必须加入巯基乙醇
 
z 50T的加入6ml；100T的加入12ml；
 
操作步骤
 
1.液氮研磨植物样本，取小于100mg样品置于RNase-free的离心管中，加入0.5ml RNAplus,振荡彻底混匀。
 
注意：RNAplus使用前须按要求加入巯基乙醇。
 
2.室温12,000×g下离心2min,转移上清至新的RNase-free的1.5ml离心管中。
 
3. 加入100μl Buffer PP,再加入300μl氯仿，剧烈混匀后室温下，12,000×g下离心3min。
 
4.小心地转移不多于80%上层水相至一新的离心管中。加入等倍体积的70%乙醇（如400μl水相，加入400μl 70%乙醇），颠倒混匀。
 
注意：70%乙醇，需要DEPC水配制，用户自备。
 
5.把吸附柱装在在2ml收集管中（已提供），将第6步得到的溶液全部转入柱中，10,000×g离心1min，倒弃流出液重新套上收集管。
 
6.加入500μl RNA Wash Buffer I至柱子中，10,000×g离心1min,倒弃流出液；
 
7.加入600μl RNA Wash Buffer II至柱子中，10,000×g离心1min,倒弃流出液；
 
注意：RNA Wash Buffer II使用前须按要求用无水乙醇稀释。如果放入冰箱中，使用前须恢复到室温。
 
8.再加入600μl RNA Wash Buffer II至柱子中，10,000×g离心1min,弃去流出液；
 
9. 将吸附柱重新套回2ml收集管中，最大转速（>13.000×g）离心空结合柱1min以干燥柱子的基质；这一步对下面的洗脱步骤至关重要。
 
10. 将吸附柱转入一个新的离心管中，加30-100μl DEPC-Water，室温放置1 分钟，12,000 rpm (~13,400×g)离心30秒。洗脱缓冲液体积不应少于30μl，体积过小影响回收效率。且RNA 应保存在-70℃，以防降解。