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- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
35
- 英文名：
Trichostrongylus spp.
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海西格
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
50T
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
| 退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
| 延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
| 产品名称 | 通用探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 英文名称 | Trichostrongylus spp. |
| 货号 | XGR7311 |
典型的PCR由
（1）高温变性模板；
（2）引物与模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
操作步骤 :
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
以下是通用探针法荧光定量PCR试剂盒的相关产品：
乙酸锰Manganous acetate tetrahydrate
其他中文名称： 锰；乙酸亚锰；亚锰；四水合乙酸锰；乙酸锰(II)四水合物
英文名称： Manganous acetate tetrahydrate
其他英文名称： Manganese(II)acetate tetrahydrate
产品： AR，99%
包装：500克
CAS号：6156781
C4H6MnO4.4H2O=2.09
级别：AR
含量：≥99.0%
锌：≤0.02%
化物：≤0.005%
盐：≤0.005%
水不溶物：≤0.005%
重金属：≤0.002%
硫化铵不沉淀物(以盐计)：≤0.2%
铁：≤0.001%
澄清度试验：合格
硫化铵不沉淀物(以盐计)：≤1.0%
性状：浅红色透明结晶。溶于水和。相对密度1.59。低毒,半数致死量(大鼠,经口)3.73G/kG。有刺激性。
用途：生化研究。氧化和二高温氧化的催化剂。油漆催干剂。媒染剂。
保存：RT
GABA4基25克BR，99%
870铋BisMuth sulfate;BisMuthous sulfate
LBBROTH,MILLER(LURIABERTANI)LB肉汤组织培养级米白色至棕褐色粉末RTsigma
3异丁基1基皇嘌呤(20℃) 3ISOBUTYL1MqTHYLXcNTHINq 88284
ADENOSINEFREEBASE腺苷高级白色晶体或结晶粉末COLDsigma
厌氧菌靛基质试验培养基100克
(D葡萄糖1二钠)
蜂蜡shēng huà shì jì容量：500毫克
沙门氏菌显色培养基 Chromogqnic Sclmonqllc cgcr Bcsq
聚乙二醇 4000 Poly(ethylene glycol) 4,000 (PEG 4000) 253223 250G 通用试剂
小鼠前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)ELISA试剂盒 ，英文名： PCSK9 ELISA Kit
人维生素D3(VD3)ELISA检测试剂盒HumanVitaminD3,VD3ELISAkit 96T/48T
大鼠整合素α2+β1(ITGA2+ITGB1)免疫试剂盒 Rat iegrin alpha-2+beta-1,ITGA2+ITGB1 ELISA kit
英文名称HumanPIIINPELISAKit人III型前胶原肽(PIIINP)规格：96T/48T
动物组织同还原酶1B(aldo-ketoreductase1B)活性比色法定量检测试剂盒20次
ELISAKiANKL兔核因子κB受体活化因子配基规格：48T/96T
通用探针法荧光定量PCR试剂盒兔子脑源性神经营养因子(BDNF)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Human adenosine deaminase (ADA) ELISA Kit 人腺苷脱氨酶(ADA)ELISA试剂盒
HumanFructose-1,6-bisphosphatealdolase,FDAELISAKit 人果糖1,6二0酸缩酶(FDA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
humandopamine,DAELISA试剂盒人多巴胺(DA)ELISA试剂盒规格：96T/48T
组织NLK激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
Humanphosphatidylserine,PSELISAKit人0脂酰丝氨酸(PS)ELISA试剂盒规格：96T/48T
PCR在分子克隆和DNA分析中有多种用途，下面就向大家介绍PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
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