碱性磷酸酶染色试剂盒（蓝色） E1043 厂家直销，提供

碱性磷酸酶染色试剂盒 (蓝色)    E1043
描述：碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, ALP)，也称碱性磷酸酯酶，是动物和微生物生理过程中一种非常重要的酶，常见于具有活跃转运功能的细胞膜内，如肾近曲小管的刷毛缘、小动脉内皮、肝脏毛细胆管膜、肾上腺、膀胱、肠上皮、附睾上皮的静纤毛等处。在碱性环境中可以水解各种天然及人工合成的磷酸单酯化合物底物。碱性磷酸酶与人类疾病如高磷酸酯酶血病、一些骨骼和肝脏疾病的发生有关，被用作很多疾病的辅助诊断依据；检测碱性磷酸酶的活性对于环境监测、食品质量控制等方面具有重要的作用。此试剂盒采用偶氮偶联法(又称同时偶联法)，结果较金属盐沉淀法灵敏可靠。该试剂盒可用于骨髓或细胞涂片、冰冻切片和梯度入水后的石蜡切片等的碱性磷酸酶染色，其染片数50~100张。
原理：在pH 9.2～9.8的碱性条件下，细胞的碱性磷酸酶将底物磷酸萘酯水解，产生α-萘酚，α-萘酚再与偶联重氮盐生成有色沉淀，终产物的颜色因所用偶氮盐的品种不同有所不同。本试剂盒α-萘酚与重氮剂固蓝RR偶联形成蓝色偶氮沉淀物，沉淀物显示的颜色深浅与碱性磷酸酶活性成正比。：

组成：（100次试剂组分，50次减半）
1. 染色液A：      4.5 ml
2. 固蓝粉末：      3管
3. 染色液B：      9 ml
4. 封片剂：        6 ml
储存：-20℃避光保存，一年有效。
适用范围：可用于骨髓或细胞涂片、冰冻切片和梯度入水后的石蜡切片等的碱性磷酸酶染色。

操作步骤： 
1. 将固蓝试剂管短暂离心，以防开管后，固蓝粉末损失，每管加纯水1.5ml溶解固蓝。固蓝溶液最好在使用当天配制。
2. 取适量固蓝溶液与等量的染液A混匀，用细菌滤器过滤，除去其中的渣滓及沉淀物。（剩余的未与染液A混合的固蓝溶液，根据下次的预期用量，分装密封避光保存于-20℃，避免反复开封与冻融，一个月内有效。）
3. 将滤液滴加到玻片组织细胞处，若是组织切片，避光室温孵育3~15min；细胞涂片或石蜡切片，避光室温孵育30~40min，若着色过浅，可适当延长孵育时间，但不要超过1.5h。
4. 自来水流水洗1-2min，流水不能直接冲在组织上，水流速度不能快，以免损坏组织。
5. 滴加染液B复染，室温孵育1-3min，水洗，方法同步骤4，若着色过浅，可适当延长孵育时间。
6. 镜检，或封片后镜检。



染色结果：碱性磷酸酶的活性部位呈蓝色，细胞核被染成红色，对比明显。。
血液、骨髓涂片结果判断：一般以积分报告结果，根据 100 个中性粒细胞阳性颗粒进行 0-4 计分。 

细胞分值	染色特点
0	无颗粒
1	稍有颗粒
2	中等程度颗粒
3	多数颗粒
4	充满颗粒

说明：
1. 将溶解后的固蓝，与染液A混合后，往往会出现沉淀物，是未酯化的萘酚与固蓝偶联形成的，过滤后溶液清明略带蓝色。
2. 为防止染色过程中染液蒸干，可置入湿盒中避光孵育。
3. 在组织切片中，碱性磷酸酶可被下列物质所抑制：碘液、15%醋酸、聚雌二醇磷酸酯、铍、半胱氨酸等。某些固定剂（如甲醛、乙醇）和包埋过程（石蜡、聚乙二醇）都可在一定程度上抑制碱性磷酸酶活性，冰冻切片的包埋剂推荐普利莱的组织冰冻切片OCT包埋剂 C1400。
4. 由于偶联重氮盐生成的有色沉淀产物不溶于水，但溶于有机溶剂，所以封片时不能使用含二甲苯的封片剂，只能甘油明胶封片剂或水溶性封片剂。
5. 第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。