
HiGene转染试剂/siRNA转染试剂(可替代Lipo20
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4°保存
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一年
- 英文名:
无
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大量
- 供应商:
普利莱
- CAS号:
无
- 规格:
0.25ml/0.5ml/50ul(体验装)/1ml
| 规格: | 0.25ml | 产品价格: | ¥550.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 0.5ml | 产品价格: | ¥900.0 |
| 规格: | 50ul(体验装) | 产品价格: | ¥20.0 |
| 规格: | 1ml | 产品价格: | ¥1600.0 |
特点:
1、 有血清转染,转染前后可不更换培养基。
2、 细胞铺板时立即转染,节省时间。
3、 媲美Lipofectamine 2000, Lipofectamine 3000 。
4、 高效转染siRNA、DNA、寡聚核苷酸。
5、 in vitro转染细胞谱广,包括各种原代细胞和神经元。
6、 in vivo动物转染,心肺肾肝脾等高效表达。
规格:0.25ml 0.5ml 1ml
储存:4度保存,一年有效
操作步骤:
自备试剂:无菌150mM NaCl即0.9%生理盐水或无菌蒸馏水或PBS缓冲液,用于离体细胞转染制备转染混合物。5%无菌葡萄糖,用于离体或在体转染转染混合物制备。与复合物颗粒形成有关,勿用其它缓冲液替代。
DNA、siRNA和寡聚核苷酸:建议溶于灭菌蒸馏水。质粒DNA高纯度OD260/280 ~1.8,无内毒素。可用内毒素清除剂(#D1501)清除内毒素。寡聚核苷酸和用于RNA干扰(siRNA)的核苷酸,可单独或与质粒DNA共转染,但必须使用经HPLC或凝胶洗脱纯化去除杂链的高纯度片段。siRNA和寡聚核苷酸与DNA转染及优化操作相似,但对其用量进行细致的优化很重要。
细胞准备(重要!)
接种细胞数:参见附表细胞计数接种。培养时间:转染前应培养~24h,使之处于分裂和旺盛生长期。细胞密度与转染时机:培养~24h后,细胞覆盖培养皿表面积的70~90%时为转染最佳时机。低密度细胞的转染率并不低,但总细胞数少因而蛋白表达总量也不会很高。在较高细胞密度时转染较好,但100%长满的细胞转染效率很低,因此接种细胞要均匀,以减少因局部紧密接触而致生长抑制的难转染细胞,否则最好重头接种细胞。HiGene允许在细胞铺板时或铺板后立即转染,效果与贴壁后转染相似,但大大节省时间和劳动,适合高通量筛选。甚至一些难转染细胞也可尝试此即时转染方法。血清和培养基:HiGene具有卓越的转染能力,血清和抗生素不影响转染,在10~30%血清培养基转染表达效率更高。转染混合物体积为培养基的1/10,参见表第5栏。如果培养基未明显变黄,转染前可不更换。如转染结果满意,转染后无需更换培养基。但转染混合物稀释了培养基,转染4~8小时后换培养基会可进一步增加转染效率。
温馨提示:
关于HiGene和DNA用量及优化、贴壁细胞转染、悬浮细胞转染、动物在体in vivo转染等详细操作步骤下载说明书查看。
描述:HiGene是经过特殊交联修饰的新一代阳离子聚合物,其高密度阳离子基团与带负电的核酸结合形成致密的纳米复合物,通过内吞入胞。在细胞内HiGene有效缓冲内吞小体的pH,保护核酸免受降解,并高效介导基因转运到胞浆胞核表达。HiGene有血清转染效率更高,并允许细胞在铺板时或铺板后立即转染,其卓越的in vitro和in vivo转染能力堪比jetPEI、Lipofectamine 2000、Lipofectamine 3000等转染试剂。
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文献和实验wywdxfsh 经常看见文献里提到这2个单词,我没搞明白,举个例子,比如我用lipo2000转染一个质粒,在设对照的时候,一个孔只加Lipo2000,一个空什么也没加,那这两个空分别叫什么呢?先谢过走过路过的xdjm,更谢谢留言回复的同志!:) freecell NC: non-specific control,非特异性对照 ,例如你的问题中的“只加Lipo2000”,以探讨某种效应是否由转染试剂影响的。 mock
RNA 干扰(RNAi)是一种转录后基因沉默的机制。同时也是一项成熟的实验技术,它的出现彻底改变了研究人员研究哺乳动物基因表达的方式,并持续为如今的基因功能研究提供有价值的实验结果。RNAi 技术大大提高了在哺乳动物细胞和动物模型中进行基因功能缺失分析的便利性、速度和特异性,因此长期以来一直是深受研究人员信赖的一种选择。 小干扰 RNA(siRNA)是 RNAi 技术中最为常用的一种手段,其在基础研究中已经发挥了巨大的作用。回到最基础的实验中,尽管已经非常成熟,想要顺利开展 siRNA 实验
。但这仍然不是精确的。通常来说,每个目标序列设计3—4对siRNAs,在后面的实验中选择最有效的那个。网上有提供免费的siRNA设计工具。体外制备1.化学合成尽管化学合成是最贵的方法,但是却是最方便的——研究人员几乎不需要做什么工作。包括Ambion和Qiagen公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高,定制周期长,特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高,为一个基因合成3—4对siRNAs 的成本就更高了,比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学












