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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
4度
- 保质期:
一年
- 英文名:
无
- 库存:
大量
- 供应商:
普利莱
- 规格:
1000次
描述:
Lowry法蛋白定量应用Folin-酚试剂法原理如下:在碱性条件下,蛋白质与铜离子作用生成蛋白质-铜络合物,此络合物将Folin试剂还原,生成深蓝色物质,其颜色深浅与蛋白含量成正比,线性范围5~500ug/ml。Lowry法蛋白定量显色反应主要与样本中的酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸含量相关,样品中含有酚类、柠檬酸和巯基化合物等可对反应产生干扰。此外,待测样本也会因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。
组成:
(1000次)
Folin 酚 A 100ml×2 室温
Folin 酚 B 5ml 室温
Folin 酚 C 20ml 室温
R1 30ml 室温
BSA蛋白标准品(5mg/ml) 1ml -20℃
以上试剂按要求温度保存,有效期至少一年。
注意:试剂开封使用后请及时密闭保存,R3试剂颜色变成深绿色即失效。
所需设备:
比色计、酶标仪或微板比色仪,最佳工作波长650nm。
操作步骤:
1.根据样本量,取适量Folin酚A和B按50:1混合,混合后24小时有效。
2.根据样本量,取适量BSA标准品用R2稀释10倍至浓度0.5mg/ml。
3.将标准品按 0、2、4、6、8、12、16、20ul加到96孔板中,加PBS补足至20ul。
4.将样品作适当稀释(最好多做几个梯度),加20ul到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点误差比较大,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
5.各孔加入配好的Folin酚A+B试剂200ul,混匀,室温静置10分钟。
6.各孔加入20ulFolin酚C试剂,迅速混匀,37℃孵育30分钟。酶标仪测定A650 OD值,绘制标准曲线,计算蛋白浓度。
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文献和实验的混合物)。在一定的条件下,兰色深度与蛋白的量成正比。 Folin―酚试剂法最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。这个测定法的优点是灵敏度高,比双缩脲法灵敏得多,缺点是费时间较长,要精确控制操作时间,标准曲线也不是严格的直线形式,且专一性较差,干扰物质较多。对双缩脲反应发生干扰的离子,同样容易干扰Lowry反应。而且对后者的影响还要大得多。酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。浓度较低的尿素(0.5%),硫酸纳
色深度与蛋白的量成正比。Folin—酚试剂法最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。这个测定法的优点是灵敏度高,比双缩脲法灵敏得多,缺点是费时间较长,要精确控制操作时间,标准曲线也不是严格的直线形式,且专一性较差,干扰物质较多。对双缩脲反应发生干扰的离子,同样容易干扰Lowry反应。而且对后者的影响还要大得多。酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。浓度较低的尿素(0.5%),硫酸纳(1%),硝酸纳(1%),三氯
[目的] 掌握Lowry法测定蛋白质浓度的原理。 [原理] 蛋白质在碱性溶液中其肽键与Cu 2+ 螯合,形成蛋白质一铜复合物,此复合物使酚 试剂 的磷钼酸还原,产生蓝色化合物,在一定条件下,利用蓝色深浅与蛋白质浓度的线性关系作标准曲线并测定样品中蛋白质的浓度。 [操作] 取试管7支、编号、按下表操作
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