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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
20
- 英文名：
Hoechst 33342 Living Cell Staining Solution
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
0.1ml|0.5ml|3ml
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：活细胞染色液(Hoechst 33342)(100×)说明书
英文名称：Hoechst 33342 Living Cell Staining Solution
产品规格：0.1ml|0.5ml|3ml
发货周期：1～3天
本品是一种适用于活细胞细胞核染色的溶液。仅需染色10分钟就能用荧光显微镜观察到非常明亮的细胞核蓝色荧光染色。本产品也适用于固定后的细胞或组织的细胞核染色。
CAS23491-52-3
分子式C27H28N6O·3HCl·3H2O
分子量615.99
激发和发射波长346nm，460nm
激发和发射波长(和双链DNA结合后)350nm，461nm
Hoechst33342是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst33342染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst33342也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。
正常培养的HeLa细胞用本产品染色后的实拍效果图。图A为正常细胞Hoehst33342的染色效果图。图B中除了正常细胞外，还清晰可见呈现致密浓染的凋亡细胞。
储存条件-20℃避光，有效期一年。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
活细胞染色液(Hoechst 33342)(100×)说明书待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
5--8-羟基-氧基酸-1-基己酯聚二醇2000/聚氧烯2000/PEG2000
1,3-二异聚二醇1500/聚氧烯1500/PEG1500
乳酸钾聚二醇1000/聚氧烯1000/PEG1000
二基异胺聚二醇800/聚氧烯800/PEG800
2-基戊酸聚二醇600/聚氧烯600/PEG600
2-氟-5-溴苄溴聚二醇400/聚氧烯400/PEG400
4-溴-2,6-二基聚二醇300/聚氧烯300/PEG300
对酸酯聚二醇200/聚氧烯200/PEG200
3-氧基羰硼酸羟高铁血红素/高铁血红素/羟基血红素/血红素/Hematin
2,2'-(1,4-亚苯基)二(4,4,5,5-四基-1,3,2-二氧硼戊环)化钕/三化钕/Neodymium(III) chloride
活细胞染色液(Hoechst 33342)(100×)说明书γ-Cyclodextrinγ-环糊精250U高，
β-Sitosterolβ-谷固250U高，
β-Propiolactoneβ-酰内酯500克BR
β-Pinen6,6-二基-2-亚基-二环[3.1.1]-庚25克BR
β-Napthyl acetate-2-酯5克高，，无水物
β-Naphthol Violetβ-紫100克99%
β-Naphthoflavoneβ-黄100毫克超，99%
β-Naphthaleneacetic acid2-500毫克USP级，
β-N-Acetylglucosaminidaseβ-N-酰基基葡萄糖苷酶25克高层析，8u/mg
β-Lactoglobulinβ-球蛋白50克USP级，96%，225IU/mg
β-Glucuronidaseβ-葡糖苷酶100克USP级，12500；2500USPu/mg（BAEE1万u/mg）
β-Galactosidase from Escherichia coli糖酶25克BR，1200u/mg
β-DPNHβ-烟酰腺嘌呤二核苷二100克重组体，500u/mg
β-DPNβ-烟酰腺嘌呤二核苷25克BR,，250-600u/mg
β-D-Glucan from barleyβ-D-葡聚糖5克BR，牛肝提取
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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文献和实验25分钟即可完成细胞凋亡检测。 2、本试剂盒提供了固定液，染色液，及抗荧光淬灭封片液。 3、对贴壁细胞，悬浮细胞和组织切片均适用。 4、足够检测100个样品。 包装清单： 固定液 50 ml Hoechst 33258染色液 50 ml 抗荧光淬灭封片液 5 ml 说明书 1 份 保存条件：4℃保存，Hoechst 33258染色液需4℃避光保存。本试剂盒自订购之日起六个月内有效。 注意事项：1、需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。 2、需PBS或0.9%NaCl溶液。 3、需
使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（ ×n ×5 ）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6． 底物请避光保存。 7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 . 8． 所有样品，洗涤液和各种废弃
PriCells: 利用Hoechst 33342外流性质分选原代角膜间质干细胞
； 实验方法： 1. 用PriCells原代细胞分离试剂盒2—4代的间质细胞； 2. 细胞计数，用DMEM/2FB将细胞稀释至1×106/cm2个细胞/ml； 3. 加入5μg/ml Hoechst 33342染料，37℃，90min，每20min搅动一次； 4. 对照组细胞在加入Hoechst 33342染料前，先加入50μg/ml维拉帕米孵育20min； 5. 染色后，在4℃环境下用HBSS/2FB将细胞洗两遍并离心，之后在冰上用冷HBSS/2FB重悬细胞； 6. 于分选前加入2μg
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