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- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
45
- 英文名：
Karvovsky Fixative Solution
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
250mL
一、Karnovsky固定液价格分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称：Karnovsky固定液价格英文名称：Karvovsky Fixative Solution
产品规格：250mL
发货周期：1～3天
Karnovsky固定液是组织化学中最常用的混合型固定液之一，主要成分含能快速渗透的和缓慢渗透的二醛。它能很好保存组织的抗原性和精细结构，故尤其适用于电镜免疫化学样品的固定。本产品是在Karnovsky原始配方的基础上修改而得。
产品特点
1．既可用于灌注法固定，也可用于浸泡法固定。
2．渗透能力强，固定均匀，组织收缩小，染色效果好。
3．适用范围广，可以用于固定从细菌、真菌，植物到动物的各种生物材料。
4．对原始配方进行了改良，不使用有毒的含砷化合物，减少了对操作者的毒害。
5．固定的组织经过包埋切片等处理用既可用于光学显微镜检测，也可用于电子显微镜检测。
储存条件低温运输、4℃保存，保存期为1年。
使用方法
1．对动物，最好先灌注固定，然后再浸泡固定10-30分钟。对植物、真菌、细菌、病毒、原虫等材料，直接采用浸泡法固定。浸泡在Karnovsky固定液中的材料可以在4℃放置5年。
2．固定后的组织洗涤后即可用于包埋、切片、染色、检测等后续操作。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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指直接装填到色谱柱中作为固定相的具有活性的多孔性固体物质。固体固定相大体可分为三类： 第一类是吸附剂。如：分子筛、硅胶、活性炭、氧化铝等； 第二类是高分子聚合物。如国内的ＧＤＸ型高分子多孔微球，国外Ｐorapak系列等； 第三类是化学键合固定相。在气相色谱中，通常是将固定液涂敷在载体表面上。采用化学键合固定相分析极性或非极性物质通常都能够得到对称峰，柱效很高，固定相的热稳定性也有所改善。 一般是一种高沸点的有机物的液膜，通过对不同
固定液 fixative， fixative solution
。渗透性很弱。另外不适宜用于细胞化学和组织化学方面的研究。在把材料放入固定液中后，固定液内外产生浓度梯度，这对保持形态是不利的。为了防止这一缺点，可把材料作成小块和薄片，同时并混以醋酸或酒精等，以提高对原生质的通透性。但是这类固定液一般具有溶解脂类的性质，会促使细胞内部结构发生变化，或因固定液急剧浸入细胞，使细胞内低分子物质流失，因此这与形态的保存是矛盾的。用固定液对材料进行固定，一般容易引起原生质收缩。各种固定液均各有其本身的缺点，对材料的固定状态也每有不同，但如果根据不同目的采取适当的处方和调整
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