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- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
58
- 英文名：
YSRIBIO-C5785
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
6mL|15mL
一、内源性生物素阻断试剂盒说明书分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称：内源性生物素阻断试剂盒说明书英文名称：IHC Biotin Block Kit
产品规格：6mL|15mL
发货周期：1～3天
储存条件冷藏（2-8℃）避光
概述
在免疫组化染色实验中，石蜡组织切片在加热抗原修复的过程中除染色强度增强外，同时会出现内源性生物素暴露的情况。在选择使用生物素-卵白素或生物素-链霉菌卵白素检测系统时，容易出现假阳性的情况。凡采用加热抗原修复和ABC、LSAB、SP法生物素检测系统，均应进行内源性生物素封闭。本试剂盒内含Avidin和D-Biotin两种成分，采用该试剂盒作为封闭剂，可以完全封闭内源性生物素。同时建议使用阴性对照，阴性对照切片抗原修复的条件要与一抗的抗原处理条件完全相同，以避免内源性生物素对染色结果的影响。
特点
本试剂盒作为封闭剂，可以完全封闭内源性生物素。
组份
试剂A；试剂B
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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内源性生物素阻断试剂盒说明书 组织蛋白酶C抗体 NMP-22 ELISA Kit 核质蛋白22(NMP-22)ELISA试剂盒
草;品型;标准品;有证书 订购|咨询 规格 0.1g
半胱蛋白酶蛋白-4抗体 NMP22 ELISA Kit 核质蛋白22(NMP22)ELISA试剂盒
四唑;品型;标准品;有证书 订购|咨询 规格 0.1g
7号染色体开放阅读框61抗体 copeptin ELISA Kit 和肽素(copeptin)ELISA试剂盒
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蚜;品型;标准品;有证书 订购|咨询 规格 0.1g
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刺激分子B7-1蛋白抗体 Tie-1 ELISA Kit 含免球蛋白样环和上皮生长子样域酪激酶1(Tie-1)ELISA试剂盒
啶脲;品型;标准品;有证书 订购|咨询 规格 0.1g
末端补体复合物抗体 setd4 ELISA Kit 含SET域4(setd4)ELISA试剂盒
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8号染色体开放阅读框55抗体 PNPLA3/ADPN/C22orf20 ELISA Kit 含patatin样脂酶域3(PNPLA3/ADPN/C22orf20)ELISA试剂盒
低聚糖-蔗三糖;品型;标准品;有证 订购|咨询 规格 20mg
培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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文献和实验液中 37℃ 温浴 10 分种； 5、PBS 液冲洗，3 分钟×3； 6、每张切片加 1 滴（50?l）过氧化酶阻断溶液，室温孵育 15 分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性； 7、PBS 液冲洗，3 分钟×3； 8、枸橼酸盐修复液冲洗，3 分种×2； 9、微波修复抗原（枸橼酸盐修复液微波高火加热至沸腾，放入切片，中低火维持沸腾 8-10 分种，自然冷却至室温）； 10、PBS 液冲洗，3 分钟×3； 11、滴加 1 滴（50 ul）正常非免疫动物血清，室温孵育 20
素与生物素高度特异性结合的关系来放大免疫组化信号，但此方法有产生内源性生物素背景的可能性。而酶标聚合物法，利用聚合物与二抗结合，形成聚合物-二抗复合物，实现信号放大，该方法不受内源性生物素的干扰。 表 2 免疫组化多种检测系统分类 图 2 酶标聚合物法检测系统 图 3 链霉亲和素-生物素法检测系统 在显色法中，针对 HRP（辣根过氧化物酶）显色系统，其常用底物为DAB/AEC（HRP/DAB 呈棕褐色染色，具有很好的光稳定性，HRP/AEC 呈红色染色，在阳光下会褪色，不易保存。 基础 IHC
SABC 法与其他免疫组织化学染色方法比较 SP法或SAP法 该法由于用链霉亲和素替代ABC法中的亲和素―生物素复合物，因此背景清晰，敏感性增加，无非特异性染色，阳性反应易于辨认。是目前最常用的方法。在操作步骤中，与SABC法相比，仅有一个步骤不同，即试剂盒中的链霉菌抗生物素―过氧化物酶替代了亲和素―生物 素―过氧化物酶。因此无需使用生物素阻断剂消除内源性生物素。SP法与SAP法的区别在于前者的放大系统为链霉亲和素―过氧化物酶，后者是链霉亲和素―碱性磷酸酶，故导致
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