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- 上海研生
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- 进口、国产
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
25
- 英文名：
详见说明书
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100ml
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：增强型蛋白印迹膜再生液规格
英文名称：
产品规格：100ml
发货周期：1～3天
产品保存4℃保存，一年有效
产品说明增强型蛋白印迹膜再生液能够安全高效地从硝酸纤维素膜和PVDF膜上去除一抗和二抗，且不会破坏抗原，从而再次检测化学发光的免疫印迹。与重新跑一个SDS-PAGE胶比较，不仅省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。
产品特点
1.不需重新制胶电泳
2.节省珍贵样品，在同一张膜上使用相同的样品重新检测
3.高效，去除效果远优于自制缓冲液
4.温和配方，在抗体剥离及重新检测时不会对靶蛋白造成伤害
5.不含硫醇，无刺鼻气味
产品应用
1.可重复使用硝酸纤维素膜或PVDF膜，通过不同的一抗检测不同的标靶
2.可重新检测印迹，改正或优化初次实验中无效的抗体浓度
注意事项
1.刚从冷冻保存中拿出来会出现SDS的沉淀，建议温水溶解再使用。
2.建议先检测表达量较低的目的蛋白，用再生液处理后检测表达量高的蛋白。
3.本品适用于NC膜和PVDF膜，推荐使用PVDF膜，效果更佳。
4.本产品适用于HRP标记的二抗，且用化学发光法检测的印迹膜。
需要材料
1.化学发光底物
2.用含0.05%Tween-20的TBS或PBS
3.用于第一次和第二次蛋白质印迹实验的一抗和二抗
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
DNADNA(鲱鱼精)1克高，85%
DMTD2,5-二巯-1,3，4-代二唑1克BS
DMT1,4-二二酯500克CP，
DMSO-d6六重二亚砜250毫克CP，98.5%
DMSO二亚砜5克色固，99%
DMP1,2-二二酯500克实习级，90-95%
DMFAN,N-二酰25克BR，
D-MethionineD-蛋25克BR，99%
DMBA二羟10克AR，99%
DMB对二1克4N
DMB二联5克生物技术级
DM二酰100毫升BR，
DMAP对二500克CP，99%
D-MannoseD-甘露糖250毫克BR，50mg/ml
D-Mannosamine HC1盐D-甘露糖25毫克高，
增强型蛋白印迹膜再生液规格L-多巴gentiopicrinADCY4 苷环化酶4抗体EB-VCA IgM EB 病 IgM(间接法二步法)兔子细胞间粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产L-状Cholic acid特价供应ADCY5 苷环化酶5抗体MP IgG 肺炎支原体 IgG(间接法二步法)鸡γ干扰(IFN-γ)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产L-状Hyodeoxycholic acid现货促销ADCY6 苷环化酶6抗体MP IgM 肺炎支原体 IgM(间接法二步法)鸭γ干扰(IFN-γ)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产L-上Deoxycholic acid特价促销ADCY7 苷环化酶7抗体IFV IgG/IFV-A IgG 流感病A IgG(间接法二步法) ELISA试剂盒山羊γ干扰(IFN-γ)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产
操作步骤(仅供参考)：
1、增强型蛋白印迹膜再生液规格贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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文献和实验底物孵育 恰当的发光或显色底物 曝光 曝光时间掌控，X-光片，显影定影试剂 后Western Blot选择 抗体剥离缓冲液（蛋白印迹膜再生液），底片北京去除剂
杂交膜的选择是决定 Western blot成败的重要环节。应根据杂交方案、被转 移蛋白的特性以及分子大小等因素，选择合适材质、孔径和规格的杂交膜。用于Western blot的膜主要有两种：硝酸纤维素膜(NC) 和 PVDF 膜。NC 膜是蛋白印迹实验的标准固相支持物，在低离子转移缓冲液的环境下，大多数带负电荷的蛋白质会与膜发生疏水作用而高亲和力的结合在一起， 但在非离子型的去污剂作用 下，结合的蛋白还可以被洗脱下来。根据被转移的蛋白分子量大小，选择不同孔 径的 NC 膜。因为随着膜孔径的不断
，特别适合于蛋白印迹 。 就韧性而言：尼龙膜较强;硝酸纤维素膜较脆，易破碎;PVDF膜较强。 就重复性而言：尼龙膜可反复用于分子 杂交，杂交后，探针分子可经碱变性被洗脱下来;硝酸纤维素膜(NC膜)不能重复使用;PVDF膜可以重复使用。 Western Blot时该选择NC膜还是PVDF膜? 硝酸纤维素膜：硝酸纤维素膜（NC膜）是蛋白印迹实验的标准固相支持物。在低离子转移缓冲 液的环境下，大多数带负电荷的蛋白质会与硝酸纤维素膜发生疏水作用而高亲和
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