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- 上海研生
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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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22
- 英文名：
详见说明书
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
1盒
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：DAB显色试剂盒×40(棕黄色)(WB专用)说明书
英文名称：
产品规格：1盒
发货周期：1～3天
试剂盒中的内容及包装规格
显色剂ADAB×40倍浓缩液,3ml。
显色剂BH2O2×40倍浓缩液,3ml。
显色剂CTBS×40倍浓缩缓冲液，3ml。
产品保存置-20℃避光冷冻保存一年。
DAB是过氧化物酶最重要的显色剂之一。显色呈鲜艳的棕黄色，可用于WesternBlotting，免疫组化及各种斑点检查法。本试剂盒采用液体性滴瓶包装，使用方便，并且减少了接触有潜在毒性的DAB。
使用方法
1．DAB显色使用DA显色试剂。按每2ml蒸馏水加显色剂A，B，C各1滴，混匀。
2．混匀后加至膜上。
3．室温显色。一般显色1－30分钟。若无背景出现则可继续显色。显色后用蒸馏水洗涤以终止反应。
4．观察，照相。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
DAB显色试剂盒×40(棕黄色)(WB专用)说明书待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
D-Sodium isoascorbiate异维生素C25克AR，98.5%
D-Serine methyl ester hydrochlorideD-丝酯盐盐25克BR，
D-SerineD-蚕丝10克BR，99%
DSCN,N'-琥珀酰亚酯10克高，98.5%
Driselase崩溃酶25克BR，2000-6000U /mg，Type VI
D-RiboseD-脆核糖1毫克BR，15～20A260单位/mg
D-Pyroglutamic acid(R)-2--5-羧5克BR，99%
DPRP1,2-二二酯5克BR
D-Prolinol(R)-(-)-2-5克BR，
D-Proline methyl ester hydrochloride右旋脯酯化物5克BR，
D-ProlineD--2-羧10克BR，99%
D-ProlinamideD-脯酰5克BR，99%
DPPH1,1-二-2-苦肼10克4N
D-PhenylglycinolR-甘1克BR，
D-phenylglycine ethyl ester•HCl(R)-α-酯化物5克BR，
DAB显色试剂盒×40(棕黄色)(WB专用)说明书1,2,3-骈三唑(+)-Catechin HydrateABP/SHBG 雄激结合蛋白抗体ADV IgG VII 病 IgG Ⅶ型(间接法二步法)小鼠糖蛋白130(gp130)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产1-羟并三唑一水物EGCG特价供应ACADM/MCAD 酰辅酶A脱酶中链抗体ADV IgM VII 病 IgM Ⅶ型(间接法二步法)大鼠糖蛋白130(gp130)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产N-羟琥珀酰亚ECG现货促销ACADL 酰辅酶A脱酶长链抗体ADV IgM XI 病 IgM Ⅺ型(间接法二步法)豚鼠肝细胞生长子(HGF)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产γ-Epigallocatechin特价促销ACADVL 酰辅酶A脱酶很长链抗体Hpt/HP (Rabbit Haptoglobin) ELISA Kit 兔结合珠蛋白/触珠蛋白肝细胞生长子(HGF)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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文献和实验wx275411643 麻烦哪位高手帮助解答一下我现在做WB遇到的情况，我买的抗体说明书上写的目的条带分子量和实际曝光出来的不一样，Marker肯定没问题了，是国内公司的抗体，问过公司，他们说是蛋白被修饰了，所以会大点。我做的结果比说明书上的大了大概10KD（书上说39KD），不知道公司的解释能不能接受？抗体是多克隆的。就怕他们用别的抗体冒充我要的。 zhe992000 看看你的蛋白质的分子量有没有问题？好多时候，蛋白在翻译
yukituki 最近做Akt的WB遇到了问题： 我用的是CST的Akt抗体以及pAkt抗体，染小鼠组织（肝，肾，脾，肺，脑等）。 5%BSA（TBST稀释）4度封闭过夜 之后一抗是5%脱脂牛奶稀释，1：500，过夜，二抗1：2000稀释，2-3h 染出来的片子很脏，而且Akt勉强可以见到，但是pAkt没染出来条带 提组织用的是RIPA（每100mg用500ul），加了PMSF以及NaF，冰上
与试剂盒的工作状态，为进一步优化打基础。 预实验时需要认真阅读各类操作说明书，使用普通样品或少量样品进行条件摸索，记录结果和问题。优化方案时，每次只改变一个变量，对比优化结果和优化前的差别，修改实验设计至达到最佳实验效果。 到此 WB 方案设计完成，实验的整体思路已经非常明确了。做好 WB 整体设计是 WB 成功的开始！当然 WB 的成功还离不开严谨的实验操作和高质量的蛋白样品，只有选择适当的蛋白样品制备方式，才能锁定最终的成功。 Invent 离心管柱法系列蛋白快速提取和亚细胞结构分离工具，可提高
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