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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
23
- 英文名：
Chromatin Immunoprecipitation(ChIP)Assay Kit
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
22次
操作步骤(仅供参考)：
1、染色质免疫沉淀检测试剂盒(ChIP检测试剂盒)说明书贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：染色质免疫沉淀检测试剂盒(ChIP检测试剂盒)说明书
英文名称：Chromatin Immunoprecipitation(ChIP)Assay Kit
产品规格：22次
发货周期：1～3天
本试剂盒用于通过免疫沉淀来沉淀和目标蛋白结合的染色质片段，最后通过PCR或Southern等方法来检测沉淀的染色质片段的试剂盒。通常用于检测特定的转录因子或组蛋白等基因组DNA结合蛋白是否和预期的特定基因组DNA序列在同一复合物中。
通过ChIP检测可以获得在体的(InVivo)目标蛋白和预期基因组DNA片段是否在同一复合物中的结论。EMSA，也称gelshift获得的结果是体外的(InVitro)目标蛋白和预期基因组DNA片段的结合结果，可以推断细胞内也发生类似的结合，但并不代表该情况在细胞内也真实发生。而ChIP的检测结果则可明确说明这种结合在细胞内是真实发生的。
本ChIPAssayKit采用了ProteinA+GAgarose，比ProteinAAgarose或ProteinGAgarose适合于免疫沉淀更多种类的抗体，包括mouseIgG1，IgG2a,IgG2b,IgG3,IgA,ratIgG1,IgG2a,IgG2b,IgG2c,rabbitIgG,rabbitandgoatpolyclonalAbs，以及humanIgG1,IgG2,IgG3和IgG4。
本试剂盒中经过SalmonSpermDNA预饱和的ProteinA+GAgarose和目的基因组DNA的非特异性结合大大下降。
提供了预混合的对照引物(ControlPrimers)。可用于扩增humanGAPDH的部分相应序列，引物序列为
5'-TACTAGCGGTTTTACGGGCG-3'；
5'-TCGAACAGGAGGAGCAGAGAGCGA-3'
本ChIPAssayKit如果用于常规的染色质免疫沉淀，共可以免疫沉淀22个样品。
产品组份
ProteinA+GAgarose/SalmonSpermDNA————3ml
GlycineSolution(10X)————————————30ml
ChIPDilutionBuffer————————————48ml
LowSaltImmuneComplexWashBuffer————24ml
HighSaltImmuneComplexWashBuffer————24ml
LiClImmuneComplexWashBuffer——————24ml
TEBuffer—————————————————48ml
0.5MEDTA—————————————————250μl
5MNaCl——————————————————500μl
1MTris,pH6.5——————————————500μl
SDSLysisBuffer—————————————10ml
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
辛酰N葡糖 含量：≥ 98% 规格：20mg/支
Mega8 含量：≥ 98% 规格：20mg/支
壬酰N葡糖 含量：≥ 98% 规格：20mg/支
Mega9 含量：≥ 98% 规格：20mg/支
醌（400K3） 含量：≥ 98% 规格：20mg/支
Menadione 含量：≥ 98% 规格：20mg/支
缩节（助壮素） 含量：≥ 98% 规格：20mg/支
Mepiquat Chloride 含量：≥ 98% 规格：20mg/支
聚酰凝胶DNA回收试剂盒 含量：≥ 98% 规格：20mg/支
PolyGel DNA Extraction Kit 含量： 规格：20mg/支
质粒大量提取试剂盒（非柱式法） 含量：≥ 98% 规格：10mg/支
QS Plasmid Maxi Kit 含量：≥ 98% 规格：10mg/支
血DNA提取试剂盒(溶型） 含量：≥98% 规格：10mg/支
RelaxISO Blood DNA Kit I 含量：≥ 97% 规格：5mg/支
血DNA提取试剂盒(溶型） 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
RelaxISO Blood DNA Kit II 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
染色质免疫沉淀检测试剂盒(ChIP检测试剂盒)说明书Celecoxib48T/96T进口、国产1620CeftiofurSodiumHPLC≥98%
48T/96T进口、国产1620CefoxitinHPLC≥98%
48T/96T进口、国产1620CefpiramideHPLC≥98%
Cephalexin48T/96T进口、国产1620Ceftazidime,Delta-3-IsomerHPLC≥98%
CephalothinSodium48T/96T进口、国产1620CeftazidimePentahydrateHPLC≥98%
CephapirinBenzathine48T/96T进口、国产1620CeftizoximeHPLC≥98%
CephapirinSodium48T/96T进口、国产1620CeftriaxoneSodiumHPLC≥98%
1、染色质免疫沉淀检测试剂盒(ChIP检测试剂盒)说明书贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：染色质免疫沉淀检测试剂盒(ChIP检测试剂盒)说明书
英文名称：Chromatin Immunoprecipitation(ChIP)Assay Kit
产品规格：22次
发货周期：1～3天
本试剂盒用于通过免疫沉淀来沉淀和目标蛋白结合的染色质片段，最后通过PCR或Southern等方法来检测沉淀的染色质片段的试剂盒。通常用于检测特定的转录因子或组蛋白等基因组DNA结合蛋白是否和预期的特定基因组DNA序列在同一复合物中。
通过ChIP检测可以获得在体的(InVivo)目标蛋白和预期基因组DNA片段是否在同一复合物中的结论。EMSA，也称gelshift获得的结果是体外的(InVitro)目标蛋白和预期基因组DNA片段的结合结果，可以推断细胞内也发生类似的结合，但并不代表该情况在细胞内也真实发生。而ChIP的检测结果则可明确说明这种结合在细胞内是真实发生的。
本ChIPAssayKit采用了ProteinA+GAgarose，比ProteinAAgarose或ProteinGAgarose适合于免疫沉淀更多种类的抗体，包括mouseIgG1，IgG2a,IgG2b,IgG3,IgA,ratIgG1,IgG2a,IgG2b,IgG2c,rabbitIgG,rabbitandgoatpolyclonalAbs，以及humanIgG1,IgG2,IgG3和IgG4。
本试剂盒中经过SalmonSpermDNA预饱和的ProteinA+GAgarose和目的基因组DNA的非特异性结合大大下降。
提供了预混合的对照引物(ControlPrimers)。可用于扩增humanGAPDH的部分相应序列，引物序列为
5'-TACTAGCGGTTTTACGGGCG-3'；
5'-TCGAACAGGAGGAGCAGAGAGCGA-3'
本ChIPAssayKit如果用于常规的染色质免疫沉淀，共可以免疫沉淀22个样品。
产品组份
ProteinA+GAgarose/SalmonSpermDNA————3ml
GlycineSolution(10X)————————————30ml
ChIPDilutionBuffer————————————48ml
LowSaltImmuneComplexWashBuffer————24ml
HighSaltImmuneComplexWashBuffer————24ml
LiClImmuneComplexWashBuffer——————24ml
TEBuffer—————————————————48ml
0.5MEDTA—————————————————250μl
5MNaCl——————————————————500μl
1MTris,pH6.5——————————————500μl
SDSLysisBuffer—————————————10ml
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
辛酰N葡糖 含量：≥ 98% 规格：20mg/支
Mega8 含量：≥ 98% 规格：20mg/支
壬酰N葡糖 含量：≥ 98% 规格：20mg/支
Mega9 含量：≥ 98% 规格：20mg/支
醌（400K3） 含量：≥ 98% 规格：20mg/支
Menadione 含量：≥ 98% 规格：20mg/支
缩节（助壮素） 含量：≥ 98% 规格：20mg/支
Mepiquat Chloride 含量：≥ 98% 规格：20mg/支
聚酰凝胶DNA回收试剂盒 含量：≥ 98% 规格：20mg/支
PolyGel DNA Extraction Kit 含量： 规格：20mg/支
质粒大量提取试剂盒（非柱式法） 含量：≥ 98% 规格：10mg/支
QS Plasmid Maxi Kit 含量：≥ 98% 规格：10mg/支
血DNA提取试剂盒(溶型） 含量：≥98% 规格：10mg/支
RelaxISO Blood DNA Kit I 含量：≥ 97% 规格：5mg/支
血DNA提取试剂盒(溶型） 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
RelaxISO Blood DNA Kit II 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
染色质免疫沉淀检测试剂盒(ChIP检测试剂盒)说明书Celecoxib48T/96T进口、国产1620CeftiofurSodiumHPLC≥98%
48T/96T进口、国产1620CefoxitinHPLC≥98%
48T/96T进口、国产1620CefpiramideHPLC≥98%
Cephalexin48T/96T进口、国产1620Ceftazidime,Delta-3-IsomerHPLC≥98%
CephalothinSodium48T/96T进口、国产1620CeftazidimePentahydrateHPLC≥98%
CephapirinBenzathine48T/96T进口、国产1620CeftizoximeHPLC≥98%
CephapirinSodium48T/96T进口、国产1620CeftriaxoneSodiumHPLC≥98%
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.5kb。1882年，德国细胞学家弗莱明首次公开发表了细胞有丝分裂现象的观察结果，他的工作也被看作是科学史上最重要的发现之一。除了对有丝分裂进行描绘以及命名之外，弗莱明还对这一过程中看似起关键作用的物质——染色质作了标记。目前，它是生物学两个最热门领域——基因组学和蛋白组学研究关注的焦点。但是，不同之处在于：弗莱明采用的是光学显微镜和装有少量苯胺染色的玻璃瓶对其进行研究，而最新的基因组阶段的染色质研究采用的是尖端的技术——染色质免疫沉淀作用测定法（ChIP）。基因组学和蛋白组学都将把染色质作为研究
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