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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
60
- 英文名：
TMB Horseradish Peroxidase Color Development Solution for Immunohistochemistryor Blotting
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100ml
英文名称：TMB Horseradish Peroxidase Color Development Solution for Immunohistochemistryor Blotting
产品规格：100ml
发货周期：1～3天
本试剂盒是一种采用了最新单一溶液TMB显色技术，通过辣根过氧化物酶(HRP)催化TMB显色，用于免疫组化、原位杂交或膜显色等的显色液。本显色液也可以用于原位检测细胞或组织内源性的过氧化物酶。
通常的TMB显色试剂由多个组份组成，必须在使用前进行配制，并且容易产生沉淀，使用相对不太方便，并且也容易导致结果不太稳定。本TMB显色液采用了最新的TMB显色技术，把所有的相关试剂全部配制在一个溶液中，仅由单一溶液组成，简化了操作步骤，并且使检测结果更加稳定可靠。
TMB，即3，3′，5，5′-Tetramethylbenzidine，是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶或其他适当过氧化物酶的催化下，TMB会产生可溶性蓝色产物。蓝色产物通常可以在370nm或620-650nm测定吸光度。
本试剂盒主要适用于免疫组化或原位杂交时HRP的显色检测，以及Western、Southern、Northern等HRP的膜显色检测。
用于免疫组化检测时，如果每个样品的显色液用量为0.1ml，则可以检测1000个样品；对于膜的显色检测，如果每次使用2.5ml显色液，则可以检测40次。
注意事项
1.TMB对人体有刺激性，请注意适当防护。
2.如果发现TMB辣根过氧化物酶显色液出现混浊或颜色变成蓝色，应该停止使用。
储存条件4℃，避光，有效期一年。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤：1．TMB显色液(组化或膜HRP显色用)哪家好用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
以下是公司正在热销产品：
噁唑 PEG 200 质量规格：BR
四唑 Sodium carbonate, decahydrate 质量规格：>99%,BR
4噻唑 Aluminum oxide, active 质量规格：BR
1,1代羰二咪唑 DTartaric acid hydrate 质量规格：>99%，BC
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4咪唑 Lithium sulfate 质量规格：>98%,BR
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注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
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为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验董太师门下的弟子最近耗费大量元神得了一批老鼠，又跑去他族求得一批圣物——人类标本，本以为离飞升上仙仅一步之遥，却在忙活了数天、耗费了三魂三魄，在 DAB 显色液滴在载玻片上的 N 刹那后，听到了自四海八荒传来的轰轰天雷——切片上的腊肉竟然毫无反应！弟子此次的天劫惊到了正在闭关的董太师，他放下正在研读的他山典籍《CNS》，走出山洞，细细端详了一番，缓缓说道：「你只学到了这门功夫的『形』，但『神』还缺些火候，现下，为师将把组化大法中需要提升的四个细节一一滴渡给你：免疫组化正确姿势中的四个细节
我的石蜡切片又「团灭」了！没关系，专业技术人员与您并肩推塔！
Antibody Diluent #8112 稀释PD-L2抗体（#82723）稀释度为1：200。11. 横沥封闭液，用卫生纸尽量吸干封闭液后，将一抗滴加在切片上。（此步建议一张张完成，防止干片）12. 将湿盒小心移入4度冰箱，过夜。CST技术人员正在配置和滴加抗体二抗孵育与显色13. 小心取出湿盒，在室温平衡45分钟左右。14. 洗涤：切片浸没于TBST中，3 ×5 min。15. 将二抗SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Rabbit)#8114
实验过程： 1. 将SIGMA公司HRP标记的羊抗兔1：10，000开始，5倍稀释。 点1ul到NC膜上，点完后迅速泡到PBS里。 2. 配好发光底物后取出膜，将SuperSignal West Pico与ELC prime 分别加200ul到两块膜上。1min后，在膜表面覆盖塑料膜。 3. 照相 4. 将照相后的膜使用蒸馏水冲洗，然后加入TMB显色底物显色，看两膜显色深浅有无差别。 结果：1. 发光情况 30s结果 1m30s 5m
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