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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
Immunol Staining Blocking Buffer
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100ml
1．免疫染色封闭液说明书用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：免疫染色封闭液说明书英文名称：Immunol Staining Blocking Buffer
产品规格：100ml
发货周期：1～3天
本品可以用于免疫染色时切片或细胞样品的封闭。封闭后，可以减小后续的一抗或二抗和样品的非特异性结合，降低背景，增强信噪比。
本免疫染色封闭液中含有适量TritonX-100，可以通透细胞膜。经本免疫染色封闭液处理的细胞样品可以检测细胞内的目的蛋白，包括细胞浆内和细胞核内的目的蛋白。
按照每组样品封闭需要5-10毫升封闭液计算，一个包装的免疫染色封闭液可以封闭10-20组样品。
注意事项通常在室温封闭60分钟即可。如果对于一些背景非常高的抗体，可以4℃封闭过夜。
储存条件4℃，有效期一年。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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免疫染色封闭液说明书CCDC42卷曲螺旋结构域蛋白42抗体小鼠6前列腺素(6KPG)ELISA试剂盒69727
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文献和实验1、试剂耗材的准备：（1）转膜缓冲液（48 mM Tris-HCl，39 mM 甘氨酸，0.037% SDS，20%甲醇）：（2）10 × 丽春红染液：（3）TBS 缓冲液：（4）TBST 缓冲液（含20%Tween20 的TBS 缓冲液）：（5）封闭液（含5%脱脂奶粉的TBST 缓冲液）：（6）一抗、二抗及抗体稀释液：参照说明书，以封闭液或TBST 进行稀释。（7）底物显色液ECL，4℃ 避光保存，现用现配。（8）显影液和定影液用水稀释10 - 20 倍于铝盒中，可多次使用。室温避光存放
出现IgG 分子50 and 25 kDa 的重链和轻链条带。 5 二抗的选择 二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。建议检查二抗说明书确保该抗体适用于你的检测应用， 二抗一般连接荧光素FITC 或发光团。 6 双重染色抗体的选择用未偶联一抗进行细胞培养物或组织切片的双重免疫染色要求一抗来源于不同物种并且二抗分别识别其中之一，二抗说明书应描述其与其它物种来源的免疫球蛋有否有交叉吸附。 想了解
浮片。2. 若所用抗体的特异性较弱，可在 0.1M PB 清洗之后用抗原修复液在常温下修复十分钟。3. 血清封闭液的选择，解决此问题可以用二抗来源的正常血清代替 BSA 做封闭液，降低抗体浓度，增加洗涤次数，洗涤至少三次，每次 10 分钟。4. 一抗的浓度不能只参考说明书要求，为找到适宜的荧光强度需在第一次使用时设置浓度梯度。一抗孵育需 4℃ 过夜，第二天可进行回收，回收后的抗体可重复使用 3 次左右。5. 共染时务必注意种属源性。一抗的种属来源不同，二抗的种属来源需对应一抗的属性。6. 封
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