封闭液(用TBS配置，不含去垢剂)说明书

中文名称：封闭液(用TBS配置，不含去垢剂)说明书
英文名称：Blocking Buffer(TBS)
产品规格：100ml
发货周期：1～3天
本品是最新一代的快速高效封闭液，总体效果显著优于传统的基于BSA(牛血清白蛋白)、脱脂奶粉、酪蛋白(Casein)等的封闭液及国外同类产品，可以用于Westernblot(WB)、Immunofluorescence(IF)、Immunohistochemistry(IHC)、Immunocytochemitry(IC)等实验中的封闭、一抗或二抗的稀释。本产品配制在TBS中，不含去垢剂。按照每张膜封闭需要5-10ml封闭液计算，一个包装的本产品可以封闭10-20张膜。
本封闭液快速高效。封闭时间通常仅需5-15分钟，并且和BSA、脱脂奶粉、酪蛋白等传统封闭液以及国外同类的快速封闭液相比，显示出更强的信噪比(参考下图)。
本封闭液封闭后背景极低。本封闭液不含血清和白蛋白，确保极高的信噪比。
本封闭液兼容性好，兼容辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶和生物素标记的二抗。本产品中添加了不影响HRP和AP活性的防腐剂，不会干扰HRP或AP标记二抗的检测。同时本产品不含生物素，不会干扰基于生物素的检测。
本封闭液使用灵活。本产品配制在TBS中，可以直接用于相关实验，但也可以根据实验需要自行添加Tween-20或TritonX-100至终浓度为0.05%-0.1%后用于封闭、一抗或二抗的稀释。
注意事项
1.本产品推荐仅使用一次，重复使用可能会导致封闭效果下降。但对于一些信噪比很高的一抗，例如一些内参抗体，本封闭液可以重复使用2-3次。回收的封闭液请勿与未使用过的封闭液混合。
2.通常本产品用于PVDF膜及NC膜时的封闭时间为5-15分钟。对于一些背景非常高的抗体，可以尝试将封闭时间延长为30-60分钟。此外，如有特殊需要，也完全可以4℃封闭过夜。
3.由于没有任何一种封闭液是适用于所有实验体系的，因此对于一些特殊的实验，可能需要根据具体情况考虑使用其它更合适的封闭液。
4.取放PVDF膜和NC膜应使用平头镊子，并仅轻轻夹取其边角，操作过程须避免膜表面产生划痕、折痕或压痕等痕迹。
5.PVDF膜一经浸润和活化，需一直保持湿润，根据Western进行到的具体步骤可放置于western转膜液或洗涤液等适当溶液中，否则可能会产生难以封闭的异常背景。
6.在背景较高的情况下，为进一步提高信噪比，本产品中可以自行添加Tween-20或TritonX-100至终浓度为0.05%-0.1%。
储存条件4℃，有效期一年。
实验报告：
一、分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤：
1．封闭液(用TBS配置，不含去垢剂)说明书用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 
以下是公司正在热销产品：
2 Gimeracil 质量规格：>99%
3溴邻二 Gimeracil 质量规格：>98%,二嘧脱(DPD)抑制剂
3 Daurinoline 质量规格：
4溴 Magnoflorine chloride 质量规格：
4'联 Magnoflorine  质量规格：
4'联 Magnoflorine iodide 质量规格：
4正联 Higenamine hydrochloride 质量规格：
封闭液(用TBS配置，不含去垢剂)说明书SPAG8相关抗原8抗体小鼠颗粒酶A(GzmsA)ELISA试剂盒25322683
NEDD4神经前体细胞发育下调蛋白4抗体小鼠淋巴细胞趋化子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA试剂盒25322683
STAM信号转导衔接蛋白1抗体小鼠血管内皮细胞生长子受体2(VEGFR2/Flk1)ELISA试剂盒25322683
SUPT16H/CDC68染色体特异性转录延伸子抗体小鼠末端补体复合物C5b9(TCCC5b9)ELISA试剂盒25322683
MEGF5/Slit3复合型表皮生长子样结构域蛋白5抗体小鼠血管内皮细胞生长子受体3(VEGFR3/Flt4)ELISA试剂盒25322683
TRIM29/ATDC共济失调细血管扩张症D相关蛋白抗体小鼠补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒25322683
UBE2V1/UEV1A泛素结合酶E2变异体1抗体小鼠肾素(Renin)ELISA试剂盒25322683
注意事项：
      尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。