核蛋白提取试剂盒

基因免疫技术的优势：
（1）由此制备的单抗具有表位广谱性，能识别种类各异的抗原表位，包括线性表位、蛋白糖基化或其他转译后修饰相关表位，以及构象性表位等，有助于筛选靶抗原蛋白上识别位点不相重叠的高亲和力配对抗体。
（2）每次免疫后得到目标抗体的成功率为80% （传统方法的成功率为30%左右）。且从基因到单克隆抗体仅需3个月（比传统方法省出一半的时间）。
（3）利用DNA免疫能诱导产生高亲和力抗体的特性，并通过用重组蛋白或重组病毒的异质性（heterogeneous）免疫加强来提高免疫应答水平，从而获得表达高亲和力抗体的亚克隆。
产品名称：核蛋白提取试剂盒
别名:细胞核蛋白提取试剂盒
英文名称:Nuclear Protein Extraction Kit
储存条件:附件PMSF-20℃，其它试剂4℃。有效期:1年
单位:瓶
产品简介： 本核蛋白提取试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。整个过程只需约60分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。得到的蛋白可以用于Western blot等实验。本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。本试剂盒可以抽提50/100个样品（每个样品约2×106个Hela细胞或40mg组织）。
规格：50T/100T
保存：核/浆蛋白抽提试剂4℃保存，PMSF于-20 ℃保存。
操作方法：
裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
一、对于体外培养细胞：
1．根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。PMSF需现用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸，可以在两种蛋白抽提液中加入DTT至终浓度0.5mM。
2．对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用EDTA消化后吹打下细胞（最好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白）。500 g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。
3．对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，500 g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
4．每20μl细胞沉淀加入200μl浆蛋白抽提试剂（2×106个细胞沉淀的体积约20μl或40mg）。
5．用移液器吹打或高速涡旋15秒（可适当延长），必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。细胞沉淀分散不完全会导致蛋白产量降低。
6．冰浴10分钟。
7．最高转速剧烈涡旋10秒，4℃ 12000～16000g离心10分钟。
8．上清即为抽提得到的细胞浆蛋白，立即吸取上清至预冷的样品管中备用，进行后续的PAGE、Western等实验，但蛋白浓度较低，可根据需要进行相应浓缩。
9．沉淀即为细胞核，要完全吸尽残余的上清（避免细胞浆蛋白的污染），加入50-100μl核蛋白抽提试剂。
10．用移液器吹打或高速涡旋15秒（可适当延长）至沉淀完全分散，冰浴10分钟。
11．最高转速剧烈涡旋10秒，4℃12000～16000g离心10分钟。12．立即吸取上清至预冷的样品管中，此即为抽提得到的细胞核蛋白。可进行后续实验或-70℃冻存。对于组织样品：把组织称重后，尽可能切成非常细小的碎片，按每50mg组织加入200μl-500μl PBS，用匀浆器冰上匀浆制成细胞悬液，500 g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，收集沉淀。加入200μl浆蛋白抽提试剂后接上述步骤5。
定量蛋白组分析:
核蛋白提取试剂盒细胞内蛋白质组丰度的动态变化对各种生命过程有重要影响。例如在许多疾病的发生和发展进程中，常常伴随着某些蛋白质的表达异常。 定量蛋白质组学就是把一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂的混合体系中所有的蛋白质进行精确的定量和鉴定。目前定量蛋白质组学技术主要分为标记（Label）和非标记的（Label Free）定量策略，其中标记策略又分为体内标记（如 SILAC、15^N 标记），以及体外标记（如 iTRAQ、TMT 标记）。


运输说明：
1、极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入公司专用的箱子，然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送至客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
2、低温产品：低温产品运输过程中加装公司专用冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入公司专用的箱子（保温效果少可以持续一周），然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送至客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
3、常温产品：常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货，准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。
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