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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
30
- 英文名：
Native lysis Buffer
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海谷研
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100ml
蛋白质是机体免疫防御功能的物质基础，当蛋白质营养不良时，其有关组织器官的结构和功能均受到不同程度的影响。
（一）免疫器官
蛋白质热能营养不良明显影响胸腺及外周淋巴器官的正常结构。且这种损伤是不可逆的，一旦受损其结构和功能恢复极为缓慢。
（二）细胞免疫
蛋白质营养不良时主要影响T淋巴细胞的数量和功能，医学教|育网搜集整理外周血中T淋巴细胞总数显著减少，对抗原诱导的增殖反应降低。
（三）体液免疫
蛋白质营养不良时，上皮及粘膜组织分泌液中SIgA显著减少，溶菌酶水平下降，使其组织抵抗力降低，甚至可导致感染扩散。特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
| 产品名称 | 非变性组织/细胞裂解液 |
| 英文名称 | Native lysis Buffer |
| 规格 | 100ml |
英文名称:Native lysis Buffer
储存条件:附件PMSF-20℃，裂解液4℃。有效期:1年
单位:瓶
非变性组织/细胞裂解缓冲液内含非离子型去垢剂，能裂解细胞并在非变性条件下释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非变性条件下的裂解蛋白产物最大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗体结合或酶学活性，因此适宜于进行免疫共沉淀。另外，有些抗体对非变性蛋白具有更高的结合能力或只能识别非变性蛋白的抗原位点，这种情况应该使用非变性裂解。
使用说明：
根据使用量，取每 1ml 裂解液加入 10ul PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔加入 150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触，冰上放置裂解 5-10 分钟。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液，冰上放置裂解 5-10 分钟。期间可以用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每 20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量) 。 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
充分裂解后，将裂解后的样品 10000-14000g 离心3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀、免疫共沉淀等操作。
注意事项：
为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。裂解时间可根据实验要求进行优化处理。
非变性蛋白裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用 BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的 Triton X-100 等干扰物质，不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
实验操作步骤：
是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。CCK法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。下面以engreen的CCK8试剂盒为例，简要说明细胞增殖-毒性检测的操作步骤
方法/步骤
在96孔板中配制100μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时 (在 37℃，5% CO2 的条件下)。
向培养板加入 10μl 不同浓度的待测物质。
将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或 48 小时)。
向每孔加入 10μl CCK8 溶液（engreen） (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数)。
5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。
用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加10μl0.1 M HCl溶液或者1%wSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化 。
以下是非变性组织/细胞裂解液的相关产品：
肽基脯氨酸异构酶酶FKBP25抗体英文全称cZRiboside,英文简称CZR 检测范围:3737nmol/L-10ng/mL
胎球蛋白B/Fetuin β抗体英文全称thymidinephosphorylase英文简称TP 检测范围:4005nmol/L-8ng/mL
胎球蛋白A英文全称Tocophernove英文简称Tocophernove 检测范围:3862nmol/L-20ng/ml
胎盘叶酸受体蛋白2抗体英文全称IgA-Fibronectin英文简称IgA-FN 检测范围:3890nmol/L-120ng/mL
胎盘特异基因8蛋白抗体英文全称Duck Hepatitis A Virus 3英文简称DHAV-3 检测范围:7329nmol/L-16ng/ml
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胎盘生长因子抗体（小鼠、大鼠、猪）英文全称adrenocortical hormones英文简称ACH 检测范围:7743nmol/L-120pg/ml
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文献和实验免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。它可以： 测定两种目标蛋白质是否在体内结合； 确定一种特定蛋白质的新的作用搭档； 分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。 一、实验原理 当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质 X 的抗体免疫沉淀 X，那么与 X 在体内结合的蛋白质 Y 也能沉淀下来。 目前多用精制的 prorein A 预先结合固化
一、原理：免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。 目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads
和靶蛋白 Y 来自细胞裂解液，那么裂解液配方建议选择非变性裂解液，NaCl 浓度＜150 nM，SDS 浓度＜0.2% 洗涤液---去除非特异结合蛋白，顾及互作蛋白间的结合强度优化配方 如果互作蛋白作用较弱，建议选择 PBS 或者 TBS 进行洗涤 通常会加入去垢剂降低背景，比如 0.5-1% NP-40/TritonX-100/CHAPS 如果效果还不佳，还可增加盐离子浓度，比如＜250 nM NaCl，以及加入1-2 nM DTT/β-ME 还可增加洗涤次数，比如 3-5 次 洗脱液---
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