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- 细胞类型:
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- 供应商:
上海一研
- 库存:
45
- 英文名:
人白血病阿霉素耐药株
- 生长状态:
贴壁生长
- 年限:
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- 运输方式:
电询
- 器官来源:
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- 是否是肿瘤细胞:
否
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- 规格:
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产品名称: 人白血病阿霉素耐药株培养
商品货号: EY-Z6921
中文名称: 人白血病阿霉素耐药株
规格:T25
生长特性:贴壁生长
细胞污染:HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。
培养条件:RPMI-1640
传代方法:1:2传代
冻存条件:无血清细胞冻存液
细胞传代步骤:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。1.
细胞复苏步骤:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
细胞冻存步骤:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例;1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
培养步骤:
人白血病阿霉素耐药株培养对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞的种类:
第一种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
Bovine Plasmin ELISA Kit 96T 中文名称牛血纤维蛋白溶酶酶联免疫试剂盒 英文名称Bovine Plasmin ELISA Kit 反应性Bovine 样品类型Serum, plasma, Cell culture supernatant 检测范围7.8-500 ng/ml 灵敏度1.6 ng/ml 检测目标Plasmin 应用Sandwich ELISA
Human Cathepsin L ELISA KIT 96T 中文名称人组织蛋白酶L检测试剂盒 英文名称Human Cathepsin L ELISA KIT 反应性Human 样品类型Serum, plasma, Cell culture supernatant 灵敏度30 pg/ml 检测目标Cathepsin L 应用Sandwich ELISA
Human BMP-2 ELISA KIT 96T 中文名称人骨形态发生蛋白2检测试剂盒 英文名称Human BMP-2 ELISA KIT 反应性Human 样品类型Serum, plasma, Cell culture supernatant 灵敏度30 pg/ml 检测目标BMP-2 应用Sandwich ELISA
Rat GM-CSF ELISA KIT 96T 中文名称大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子检测试剂盒 英文名称Rat GM-CSF ELISA KIT 反应性Rat 样品类型Serum, plasma, Cell culture supernatant 灵敏度4 pg/ml 检测目标GM-CSF 应用Sandwich ELISA
Human IL-1R4 ELISA KIT 96T 中文名称人白细胞介素1受体4检测试剂盒 英文名称Human IL-1R4 ELISA KIT 反应性Human 样品类型Serum, plasma, Cell culture supernatant 灵敏度15 pg/ml 检测目标IL-1R4/ST2 应用Sandwich ELISA
Human IL-12 ELISA KIT 96T 中文名称人白细胞介素12检测试剂盒 英文名称Human IL-12 ELISA KIT 反应性Human 样品类型Serum, plasma, Cell culture supernatant 灵敏度7 pg/ml 检测目标IL-12/IL-23 p40 应用Sandwich ELISA
Human LOX-1 ELISA KIT 96T 中文名称人凝集素样氧化低密度脂蛋白受体检测试剂盒 英文名称Human LOX-1 ELISA KIT 反应性Human 样品类型Serum, plasma, Cell culture supernatant 灵敏度15 pg/ml 检测目标LOX-1 应用Sandwich ELISA
Human IL-1 sRII ELISA KIT 96T 中文名称人白细胞介素1可溶性受体II型检测试剂盒 英文名称Human IL-1 sRII ELISA KIT 反应性Human 样品类型Serum, plasma, Cell culture supernatant 灵敏度15 pg/ml 检测目标IL-1 sRII 应用Sandwich ELISA
固公果根 订购|咨询 大鼠c-fos ELISA Kit 大鼠c-fos 规格: 2g
二基庚A 订购|咨询 ADAM9 ELISA Kit 小鼠解整合素样金属蛋白酶9 规格: 20mg
异土木香内酯 订购|咨询 HB-EGF(Human heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor) ELISA Kit 人肝素结合性表皮生长因子 规格: 20mg
大果木姜子 订购|咨询 Plant growth hormone,GH ELISA Kit 植物生长激素 规格: 3g
人白血病阿霉素耐药株培养glypican 1 磷脂酰基醇蛋白聚糖-1抗体规格 0.2ml
Glycophorin C/CD236 糖蛋白C抗体规格 0.1ml
Glycogen synthase 2 葡萄糖合成酶2抗体规格 0.2ml
Glycogen synthase 1 葡萄糖合成酶1抗体规格 0.2ml
Glycodelin A/PP14 胎盘蛋白14抗体规格 0.1ml
Glycerol kinase 甘油激酶抗体规格 0.2ml
Glutaredoxin 1 谷氧还蛋白/巯基转移酶抗体规格 0.2ml
操作流程:
1.1主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100%,计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线。
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