人骨髓单个核细胞分离液试剂盒说明书

产品名称  人骨髓单个核细胞分离液试剂盒说明书
规格： 200ml/KIT
有效期有效期2年
储存条件   RT，避光，有效期2年
单位盒
本品用于分离人骨髓单个核细胞。
本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。


1. 悬浮细胞，2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎，造成假阳性，过短，细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶消化液，加入细胞培养液终止消化，2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS，洗涤细胞2次（2000rpm x 5min）,收集细胞2～5×105 。
3. 离心弃上清，加入500μL结合缓冲液，轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC，轻轻吹打混匀，加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许，可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。

细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。

      人骨髓单个核细胞分离液试剂盒说明书尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 试剂A和试剂B各一支添加于225ml（026080）中配成FB1增菌液。 2x5支
100U Klenow 片段  
1瓶 U87MG细胞株 U87MG 低温运输和保存
不完全琼脂培养基 英文名称：Incomplete Agar Medium 产品规格：250g 
10uL AP标记的抗辛抗体 Anti DIG Ab,AP 4℃保存
25mg 蛋白酶 K Proteinase K  4℃保存
布氏肉汤添加剂（2ml/支） Brucella Broth Supplement 2ml/支*5
乳糖-双岐杆菌鉴定  20支
200 mL 大鼠淋巴细胞分离液1.083 Cell Separation Solution -20℃保存
1瓶 MKN-28细胞株 MKN-28 低温运输和保存
2 ug pTA-Luc pTA-Luc 低温运输，-20℃保存
100mL DNA级Tris HCl，1M，pH6.5  
200U AMV逆转录酶 AMV Reverse Transcriptase -20℃保存
50T 玉米BT176 PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存
联合固氮菌培养基 Combined nitrogen-fixing bacteria medium 250g
改良马丁培养基管 英文名称： 产品规格：10ml*20支 
1瓶 COS-7 SV40细胞株 COS-7 SV40 低温运输和保存
人骨髓单个核细胞分离液试剂盒说明书1,4-二羟基蒽醌(>96%,BR) 1,4-Dihydroxyanthraquinone 81-64-1 质量规格：>96%,BR
革兰氏阳性菌质粒小量提取试剂盒 1T  盒
5'-羟基美洛昔康 5'-Hydroxy Meloxicam 130262-92-9 质量规格：美国进口
D-苹果酸(>98%，BR) D-Malic acid 636-61-3 质量规格：>98%，BR
齐拉西酮（标准品） Ziprasidone mesilate 199191-69-0 质量规格：HPLC法含量测定
PEG 80 聚乙二醇 80 5g  瓶
β-NADP;β-烟酰腺嘌呤二核苷酸磷酸;氧化型辅酶 II β-NADP 24292-2 质量规格：>95%,BR
鲁拉西酮 Lurasidone HCl 3614-88-3 质量规格：>99%,BR
精氮氧化加合物 Spermine NONOate 1367-13-8 质量规格：美国进口
生物素化羊抗人IgA 0.1ml  支
2,5-二硒酚(>98.0%(GC)) 2,5-Dibromoselenophene 15-36-8 质量规格：>98.0%(GC)
肉桂(标准品) Cinnamaldehyde 104-55-2 质量规格：GC≥99%，标准品
新霉素 Neomycin sulfate 1405-10-3 质量规格：≥6 I.U. /mg,USP,BR
1--4-正辛基(>98.0%(GC)) 1-Bromo-4-n-octylbenzene 51554-93-9 质量规格：>98.0%(GC)
槐定碱（标准品） Sophoridine 6882-68-4;148-91-8;641-39-4 质量规格：HPLC≥96.50%，标准品
霜灵标准溶液(1μg/ml,u=5%) Metalaxyl solution 577-19-1 质量规格：1μg/ml,u=5%