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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20°C
- 供应商:
ABclonal
- 规格:
10 rxn/100 rxn
| 规格: | 10 rxn | 产品价格: | ¥230.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 100 rxn | 产品价格: | ¥1200.0 |
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文献和实验真香!用 qPCR 做外泌体研究,南京医科大学拿下 41 分 SCI
等)、miRNA 加尾法逆转录试剂盒做反转录:适用于短片段 RNA(主要为 miRNA)的加尾法。 4)qPCR 检测 采用 Umibio 2×SYBR Green qPCR 试剂:预混 ROX1 型适用于 ABI 5700 等设备、预混 ROX2 型适用于 ABI 7500 等设备。 5)数据分析:采用仪器自带的 QPCR 分析软件进行数据分析 可以看到 qPCR 检测外泌体可行且可靠,但实验过程并不简单,因此我们对经常会遇到的问题及解答也进行了整理,帮助大家更好的完成实验。 qPCR检测外泌常见问题及解决
成功做完了逆转录,这时候可能有些疲累了。筛引物、做定量的时候要加样的孔也较多,即使使用了 qPCR 预混液,也有加错样的可能发生。诺唯赞的 ChamQTM SYBR® Color qPCR Master Mix 系列(Q411 /Q421 /Q431 /Q441)提供不同颜色的试剂,利用移液过程中的变色效应,追踪移液过程,可以极大的减少移液错误。 引物设计有原则 在使用 SYBR 染料法时,引物设计需遵循以下原则:引物长度 18~25bp,产物长度 80~300bp,GC 含量 40~60
的动态范围或线性度最佳,可确保基因表达定量的准确性。 所选试剂在扩增过程中应产生较高且一致的 cDNA 得率,以获得具有高灵敏度和低变异性的基因表达结果。可考虑预混液形式的逆转录酶用以可以减少实验误差。 RT-qPCR 的一个特殊程序是从未经 RNA 分离的粗细胞裂解物直接进行逆转录。在使用稀缺样本或选用群体内特定细胞的实验,可考虑使用直接 RT-qPCR 法来防止可能的样本损失和低 RNA 回收。 cDNA 克隆和文库构建 cDNA 文库可由代表特定样本中转录序列的 cDNA 克隆组成
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