平板克隆

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简介克隆形成试验可反映细胞群体依赖性和增殖能力。
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- 服务名称：
  平板克隆
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  MDL-百奥思科
克隆形成试验可反映细胞群体依赖性和增殖能力。一般细胞在体外增殖六代以上，其后代形成的细胞群体称为细胞集落或克隆。每个克隆由单一细胞而来，含有50个以上细胞，大小在0.3-1mm之间。通过克隆形成可检测各种理化因素对细胞克隆形成能力的影响。平板克隆形成试验可检测贴壁细胞细胞的克隆形成能力，软琼脂集落形成试验可检测非锚着依赖生长的细胞，如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系等。基本步骤：1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃ 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3周。3、经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加甲醛固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液，加适量GIMSA应用染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜（低倍镜）计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。克隆形成率 =（克隆数/接种细胞数）×100% 服务流程：1）项目方案的确定，包括目的细胞、细胞处理方式及处理时间等。2）细胞培养3）克隆形成实验4）克隆形成实验图片及实验报告服务周期：3～5周

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- 询问日期
- dxy_****3fc3
- 我对您在丁香通发布的『平板克隆』非常感兴趣。请联系我并提供报价。
- 2020-6-17
- dxy_****3fc3
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- 2020-6-17
- 平板细胞克隆形成试验
 
 当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。平板细胞克隆适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞可用于（1）细胞增殖实验（2）细胞群体依赖性检测
- 通过平板裂解和洗脱制备λ噬菌体原种实验
 
 来源于单个噬菌斑的噬菌体原种的制备，通常有两种方法：① 平板裂解，这是一种噬菌体在生长于顶层琼脂或琼脂糖的细菌中增殖的方法；② 小量液体培养，这是用生长于液体培养基中的细菌进行噬菌体增殖的方法。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。
- λ噬菌体分离物的快速分析(从液体培养物中纯化λDNA)实验
 
 如本方案所述，噬菌体 DNA 可很容易地从液体培养物中纯化出来。而前一个方案则阐述了从平板裂解物中纯化噬菌体 DNA 的方法。一般来说，噬菌体在液体培养物中的生长不如平板裂解物中的。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。
- 噬菌体文库的扩增实验
 
 文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。
- 粘粒和质粒文库的扩增实验
 
 文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。
- 噬菌体文库的铺平板和转移实验
 
 文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。
- 粘粒及质粒文库的铺平板和转移实验
 
 文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。
- 粘粒和质粒克隆的纯化实验
 
 文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。
- 用小量液体培养物制备λ噬菌体原种实验
 
 可通过小量液体培养物制备高滴度噬菌体原种。这一方法最早由 Leder 等（1977）采用。一般来说，它所得到的噬菌体的产量比平板裂解低且不稳定，另外噬菌体最初的接种量也大。但是，在液体培养物中制备的噬菌体原种将更清亮，并且也不含污染平板裂解物的硫酸盐多糖。本实验来源「分子克隆实验指南第三
- 筛选构建于λ噬菌体载体的表达文库实验
 
 在典型的免疫筛选实验中，噬菌体表达载体构建的文库应铺在不含异丙基硫代--D-半乳糖苷（IPTG) 的大肠杆菌菌株的平板上。诱导物的缺少保证了噬菌斑顺利形成前不产生对宿主有毒性的融合蛋白，2~4 h 后，将平板从 42C 移到 37C 以稳定温度敏感型的所有融合蛋白。本实验来源于分子克隆实验指南
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