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MDL-北京百奥思科
常见的肿瘤动物模型的构建
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下面简单介绍诱发性肿瘤动物模型的实验方法:
诱发性肿瘤动物模型是指研究者用化学致癌剂、放射线、致癌病毒诱发动物的肿瘤等。
一、肝癌
1.二乙基亚硝胺(DEN)诱发大白鼠肝癌
(1)取体重250g左右的封闭群大白鼠,雌雄不限;
(2)按性别分笼饲养。除给普通食物外,饲以致癌物,即用0.25%的DEN水溶液灌胃,剂量为10mg/kg,每周一次,其余5天用0.025%的DEN水溶液放入水瓶中,任其自由饮用;
(3)共约4个月可诱发成肝癌;
(4)也可以单用0.005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。
2.4-2甲基氨基氮苯(DBA)诱发大鼠肝癌
(1)用含0.06%的DBA饲料喂养大鼠,饲料中维生素B2不应超过1.5~2mg/kg;
(2)4~6月就有大量的肝癌诱发成功。
3.2-乙酰氨基酸(2AAF)诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌
(1)给成年大鼠含0.03%的2AAF标准饲料;
(2)每日每只平均2~3mg的2AAF(也可将2AAF混于油中灌喂),3~4月后有80~90%动物产生肝癌。
4.二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌
(1)用剂量为每日0.3~14mg/kg体重,混于饲料或饮水中;
(2)6~9个月后255/300大鼠发生了肝癌。
5.亚胺基偶氮甲苯(OAAT)诱发小鼠肝癌
(1)用1%的OAAF苯溶液(约0.1ml含1mg)涂在动物的两肩胛间皮肤上,隔日一次,每次2~3滴,一般涂100次。
(2)实验后7~8周即而出现第一个肝肿瘤,7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。
(3)或用2.5mg的OAAT溶于葵瓜子油中,给C3H小鼠皮下注射4次,每次间隔10天,也可诱发成肝癌。
二、 胃癌
1.甲基胆蒽诱发小鼠胃癌
(1)取20g左右的小鼠,无菌手术下,在腺胃粘膜面穿挂含甲基胆蒽(MC)线结。
(2)含MC的线结是用普通细线,在一端打结后,将线结置于盛有MC小玻璃试管内,在酒精灯上微微加温,使MC液化渗入线结。MC浓度为0.05~0.1g的甲基胆蒽内浸入10~20根线。
(3)手术埋线后4~8个月可诱发成功胃癌。
2.不对称亚硝胺诱发小鼠胃癌
剂量为0.25ml/kg体重,3个月后全部动物发生前胃乳头状癌,7~8个月后有85~100%发生前胃癌。昆明种最敏感。A系次之,615系小鼠敏感性最差。
3.甲基亚硝基醋酸尿素诱发小鼠胃癌
给BD大鼠饮水中加甲基亚硝基醋酸尿素,剂量为2mg/kg体重,每周饮用5次,520天后全部大鼠均发生了腺胃癌。
三、食管癌
1.MBNA诱发大鼠食管癌
(1)取体重100g以上的Wistar大鼠;
(2)任其食用含MBNA的饮水,并将MBNA掺入饲料中使每日摄入量达0.75~1.5mg/kg体重;
(3)80~100天可诱发成食管癌。
四、肺癌
1.二乙基亚硝胺(DEN)诱发小鼠肺癌
(1)小白鼠每周皮下注射1%的DEN水溶液一次,每次剂量56mg/kg,DEN总剂量达到868mg;
(2)观察时间为100天左右时,发癌率可达40%。
(3)DEN总剂量达到1176mg,观察时间为半年左右时;发癌率可达94%。
2.乌拉坦诱发肺腺癌
(1)小鼠(A系,1~11/2月龄)较大鼠敏感,每次每只腹腔注入10%乌拉坦生理盐水液0.1~0.3ml,间隔3~5日再注,共注2~3个月,每只小鼠用量约为100mg;
(2)注后3个月肺腺癌发生率为100%,而且多数为多发性,这种诱发瘤为良性。
3.苯并芘诱发肺腺癌
(1)猴气管内注入3,4-苯并芘(苯并芘为3~15mg与等量之Fe2O3混合液),每周一次,共10次;
(2)6只猴中有2只诱发肺的鳞状上皮癌。
4.硫酸铵气溶胶诱发肺腺癌
(1)用硫酸胺气溶剂给100只大鼠吸入;
(2)13个月后所有大鼠都发生了肺腺癌。
5.甲基胆蒽诱发肺腺癌
(1)用0.2%明胶作悬浮剂将甲基胆蒽混合后给金地鼠气管内注入,每次0.1ml(含甲基胆蒽5mg)每周一次,共6次;
(2)53周后有62.5%动物发生了肺癌。
五、鼻咽癌
1.二甲基胆蒽(MC)诱发大鼠鼻咽癌
(1)取直径2~3mm的硬质塑管,在酒精灯上小火拉成锥形,每段长约3.5 cm,管内填以结晶体MC。
(2)小管一端用火封闭,以防药物外溢,尖端用针刺数孔,使MC能从小孔溢出。
(3)取体重120g左右的大白鼠,雌雄均可,药麻后,由前鼻孔将上述含MC的塑料小管插入鼻腔,利用前鼻孔较小管粗端为小的特点,稍加用力,迫使小管全部进入鼻腔内,其尖部可达鼻咽腔。不需另加固定,即可使小管长期留于鼻腔内。
(4)待到预定时间(半年以上),或动物自行死亡时,到其鼻咽部,10%福尔马林固定,脱钙后,石蜡包埋,进行连续切片。发癌率可达60%以上。
2.二乙基亚硝胺滴鼻法诱发鼻咽癌
(1)取120g左右大白鼠,雌雄均可,药麻后,用磨平针尖的8号针头,从前鼻孔轻轻插入,针尖可达鼻咽腔;
(2)经注射器灌注用1%吐温-80新配的33.3%的DEN混悬液0.02ml(含DEN6.7mg)每周1次,共15~20次,可诱发成鼻咽癌。
六、宫颈癌
二甲基胆蒽(MC)诱发宫颈癌
取雌性小白鼠,以附有0.1mg的MC棉纱线结在动物不麻醉的状态下,借助于阴道扩张器及磨纯的弯针,将线穿入宫颈。经右宫角背部穿出,使线结固定于宫颈口。线的另一端则固定于背部肌肉,缝合皮肤,挂线以后,同日开始连续注射青霉素2~3天。以防术后感染。至一定时间(半年左右)处死动物,宫颈组织用10%福尔马林固定,石蜡包埋,连续切片。
七、结肠癌
二甲基苄肼(Dimethlhydrazine,DMH)诱发鼻咽癌
(1)给四周龄的雄性大白鼠,皮下注射二甲基苄肼(Dimethlhydrazine,DMH)每周一次,连续21周,每次DMH含量21mg/kg;
(2)最后一次给药后1~4周,处死动物;
(3)降结肠部位用Bouin液固定,脱水,石蜡包埋,切片。所用之DMH先配成每100ml含400mg的母液,并加EDTA含量37mg,用氢氧化纳(0.1N)液将pH调至6.5备用。
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