Mouse resistin ELISA Kit

碧云天的Mouse Resistin ELISA Kit (Mouse Resistin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠抵抗素酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的Resistin的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为17.8pg/ml，与人Adiponectin/Acrp30、IGF-I、IGF-II、IL-6、Leptin、LIF、TNF-α、Resistin等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
小鼠抵抗素(Resistin)是一种分子量为11kDa，富含半胱氨酸的多肽，属于炎症相关因子家族。抵抗素合成时首先得到氨基酸长度为114的前体蛋白，其中包括20个氨基酸长度的信号肽和94个氨基酸长度的成熟片段，结构中包含5个分子内二硫键和多个β转角。抵抗素与RELMα、RELMβ和RELMγ均属于RELM/FIZZ家族，四个分子中都具有高度保守的10个半胱氨酸残基，成熟的小鼠抵抗素与其它三种分子分别具有34% (RELMα)、42% (RELMβ)和40% (RELMγ)的氨基酸同源性。成熟的小鼠抵抗素和大鼠抵抗素也具有72%的氨基酸同源性。啮齿类动物中表达抵抗素的细胞主要有脂肪细胞、小肠上皮细胞、骨骼肌细胞和星形胶质细胞。人体内表达抵抗素的细胞则主要有合胞体滋养层、单核细胞/巨噬细胞和脂肪细胞。
在正常小鼠体内，抵抗素会导致葡萄糖吸收障碍，但并不伴随着胰岛素水平的减少，同时，抵抗素还会增加胰岛素介导的脂肪组织对葡萄糖的摄取。在大鼠体内，抵抗素同样参与胰岛素介导的骨骼肌对葡萄糖的摄取，扩大了抵抗素所能影响的组织类型。但是上述这些作用效果仅适用于啮齿类动物，在人体内并不确定是否存在相同的作用。人抵抗素的基因结构和主要来源提示在人体内抵抗素可能具有不同的生物学效应。有新的研究数据表明抵抗素也是一种促炎因子，与TNF-α相同，抵抗素能够激活内皮细胞，诱导ICAM-1和VCAM-1的表达，促进MCP-1和ET-1的分泌。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中小鼠Resistin的浓度，其原理见图1。小鼠Resistin特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的小鼠Resistin会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗小鼠Resistin抗体后，生物素化抗小鼠Resistin抗体与小鼠Resistin结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。小鼠Resistin浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中小鼠Resistin浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PR793-1	小鼠Resistin抗体预包被板	8孔×12条
PR793-2	标准品稀释液(5X)	20ml
PR793-3	小鼠Resistin标准品	2-4瓶
PR793-4	小鼠Resistin生物素化抗体	10ml
PR793-5	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PR793-6	洗涤液(20X)	30ml
PR793-7	TMB溶液	10ml
PR793-8	终止液	5ml
PR793-9	封板膜(透明)	2张
PR793-10	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。