Human CCL5/RANTES ELISA Kit

碧云天的Human CCL5/RANTES ELISA Kit (Human Regulated upon Activation, Normal T cell Expressed and 
presumably Secreted, RANTES Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人趋化因子蛋白RANTES酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的CCL5/RANTES的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为34pg/ml，与人ANG 、EGF 、Epo 、FGF acidic 、HGF、 IFN-γ、 FGF basic，小鼠CCL5等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
RANTES (Regulated upon Activation, Normal T cell Expressed and presumably Secreted)又称趋化因子5 (Chemokine C-C motif Ligand, CCL5)，是趋化因子CC亚族的成员之一。RANTES能够对淋巴细胞产生趋化作用，并调节其功能，从而在炎性免疫反应中具有重要作用。人RANTES的cDNA编码产生91个氨基酸的前体蛋白，其中包括23个氨基酸的疏水信号肽，信号肽裂解后得到68个氨基酸的成熟蛋白。人RANTES与小鼠RANTES大约具有85%的氨基酸同源性。
RANTES对多种细胞都具有化学趋化作用，例如未激活的(CD4⁺/CD45RO⁺)记忆T细胞和活化的CD4⁺、CD8⁺T细胞、自然杀伤细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、树突状细胞、肥大细胞、单核细胞和小神经胶质细胞等。除了影响细胞迁移外，RANTES还能激活多种细胞，包括T细胞、单核细胞、中性粒细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞和星形胶质细胞等。T细胞的激活通常需要相对较高的RANTES浓度(~1μM)，并且需要小分子的聚集和细胞表面粘多糖的参与。
RANTES能够与CCR1、CCR3、CCR4、CCR5等4种G蛋白偶联受体作用。RANTES能够激活多种信号通路，例如在T细胞中，RANTES能够刺激细胞内Ca2⁺浓度升高，激活FAK、PKA、PI3K等多种蛋白激酶和JAK/STAT信号通路。巨细胞病毒US28与CC趋化因子受体具有高度同源性，也能够与RANTES结合。在不同细胞环境下，跨膜的US28能够与RANTES结合激活G蛋白偶联受体介导的下游信号，或者阻断RANTES从而改变炎性应答反应。在RANTES4种受体中，CCR5同样也能够与HIV-1的变体结合，因此RANTES、MIP-1α和MIP-1β作为CCR5的配体能够竞争性抑制CCR5/HIV-1的相互作用，在体外抑制HIV-1感染。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人CCL5/RANTES的浓度，其原理见图1。人CCL5/RANTES特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人CCL5/RANTES会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人CCL5/RANTES抗体后，生物素化抗人CCL5/RANTES抗体与人CCL5/RANTES结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人CCL5/RANTES浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人CCL5/RANTES浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PC160-1	人CCL5/RANTES抗体预包被板	8孔×12条
PC160-2	样品分析缓冲液	5ml
PC160-3	标准品稀释液(5X)	20ml
PC160-4	人CCL5/RANTES标准品	2-4瓶
PC160-5	人CCL5/RANTES生物素化抗体	10ml
PC160-6	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PC160-7	洗涤液(20X)	30ml
PC160-8	TMB溶液	10ml
PC160-9	终止液	5ml
PC160-10	封板膜(透明)	2张
PC160-11	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。