Human CRP ELISA Kit

碧云天的Human CRP ELISA Kit (Human C-Reactive Protein Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人C反应蛋白酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的CRP的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为1.4ng/ml。板内、板间变异系数均小于10%。如需进行更高灵敏度的检测，可选用Human CRP ELISA Kit (Ultrasensitive) (PC198)，该试剂盒最小检出量为14.8pg/ml。
C反应蛋白(C-Reactive Protein, CRP)，又叫正五聚蛋白1(Pentraxin 1)，是一种非糖基化蛋白，属于正五聚蛋白家族，该家族中还包括正五聚蛋白2/SAP和正五聚蛋白3/TSG-14。CRP的主要功能是作为先天性免疫反应的传感器和活化剂。在人体内，CRP是一种主要的急性时相蛋白，其循环浓度在炎症初始时会显著升高。然而在小鼠体内，血浆CRP水平在炎症发生期间仅出现轻微上升，正五聚蛋白2则具有与CRP在人体内相类似的浓度变化。CRP蛋白通过非共价键自组装形成分子量在110-120kDa之间的五聚体，成熟的人CRP与小鼠CRP和大鼠CRP分别具有71%和64%的氨基酸同源性。
CRP能够与凋亡的细胞及细菌结合并促进其被吞噬细胞吞噬，CRP还能与补体级联系统中的一些蛋白如C1q、C4BP和Factor H结合，增强经典补体激活途径的活化，并增加C3b蛋白的沉积，在之后的应答过程中，CRP能够通过与C4BP和Factor H结合抑制补体调节细胞的溶解。这些作用能够诱导补体抑制蛋白CD46、CD59和CD55/DAF的表达，抑制膜攻击复合物(Membrane Attack Complex, MAC)的合成。
CRP与巨噬细胞和树突状细胞表面的Fcγ RIA和Fcγ RIIB结合使得CRP连接的靶细胞被细胞吞噬清除，Fc受体也是这一过程的必不可少的受体之一。CRP与Fcγ RⅠ结合，诱导Src活化，并抑制炎症反应。另外CRP还能够促进树突状细胞成熟，增强体液免疫。但在心血管疾病当中，CRP能够与被氧化的低密度脂蛋白结合，加剧冠状动脉梗塞部位的组织损伤，抑制受损血管内皮的修复。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人CRP的浓度，其原理见图1。人CRP特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人CRP会与捕获抗体结合。当加入辣根过氧化物酶标记人CRP抗体后，辣根过氧化物酶标记人CRP抗体与人CRP结合，形成夹心的免疫复合物。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人CRP浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人CRP浓度。

 

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PC190-1	人CRP抗体预包被板	8孔×12条
PC190-2	标准品稀释液(5X)	20ml
PC190-3	人CRP标准品	2-4瓶
PC190-4	辣根过氧化物酶标记人CRP抗体	10ml
PC190-5	洗涤液(20X)	30ml
PC190-6	TMB溶液	10ml
PC190-7	终止液	5ml
PC190-8	封板膜(透明)	2张
PC190-9	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

 

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。