Human TGF-β1 ELISA Kit

碧云天的Human TGF-β1 ELISA Kit (Human Transforming Growth Factor-β1 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人转化生长因子β1酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的TGF-β1的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为1.8pg/ml，与人TGF-β2、TGF-β3等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
人转化生长因子β1(Transforming Growth Factor-β1, TGF-β1)是一种由二硫键连接而成的同源二聚体蛋白，分子量在25kDa，在免疫和机体维持稳态过程中具有重要作用。TGF-β1由390个氨基酸组成，包括23个氨基酸的信号肽，255个氨基酸的pro肽和112个氨基酸的成熟片段。TGF-β1通常以无活性的前体蛋白形式分泌。分泌前，完整的TGF-β链首先剪切掉信号肽区域，随后在pro肽发生糖基化反应，之后在弗林蛋白酶的作用下得到TGF-β单体，单体通过二硫键形成分子量在25kDa的二聚体。TGF-β二聚体随后与无活性相关肽(Latency-associated Protein, LAP)以非共价键结合形成无活性的复合物。为了促进TGF-β分泌和细胞外储存，分子量在200kDa的前体TGF-β结合蛋白(Latent TGF-β Binding Protein, LTBP)与LAP以共价键相连，形成了大的休眠复合物。当该复合物被分泌后，TGF-β通过LTBP与细胞外基质以共价键相连，随后在蛋白酶的作用下，暴露出LAP上的甘露糖残基，该甘露糖残基能与细胞表面的IGF- II R连接，随后分泌出具有活性的TGF-β二聚体。成熟的小鼠TGF-β与大鼠和棉鼠TGF-β具有100%的氨基酸同源性，与人、犬、猪TGF-β具有99%的氨基酸同源性，与豚鼠TGF-β具有97%的氨基酸同源性。成熟的小鼠TGF-β1与小鼠TGF-β2和β3也分别具有72%和78%的氨基酸同源性。
TGF-β1的受体复合物是由两种跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶受体组成的复合物，包括分子量为80kDa的配体结合糖蛋白TβR II和分子量为55kDa的信号传递糖蛋白TβR I/ALK-5。TGF-β1与TβR II结合诱发TβR I的磷酸化，实现信号传导。除了上述两种受体外，还存在第三种TGF-β1受体TβR III，其可以是250kDa的β糖蛋白或者是180kDa的内皮糖蛋白(又称CD105)。TβR III主要作用是捕获TGF-β并将其传递给TβR II，但这一作用可能特指β糖蛋白。内皮糖蛋白单独存在时并不能直接与TGF-β1结合，但有证据表明内皮糖蛋白能够进入TGF-β1受体复合物，调节TGF-β下游信号。
TGF-β1具有广泛的生物学功能，在免疫应答过程中，TGF-β1能够诱导抗体的产生，改变树突状细胞表面趋化因子受体表达从而调控树突状细胞的趋药性，同时还能通过抑制巨噬细胞活性，减少促炎因子产生从而下调炎症反应。在伤口愈合过程中，活化的血小板分泌TGF-β1，并对成纤维细胞产生刺激效应，诱导基质生成；TGF-β1还能作用于单核细胞和角质细胞，促进炎症调节因子和生长因子分泌，促进角质细胞分化。TGF-β在软骨内骨化过程中也发挥重要作用。TGF-β首先与TβR II结合，然后募集并磷酸化TβR I，活化的受体随后磷酸化受体激活型Smads (R-Smads)，磷酸化后的R-Smads再与辅助型Smads (Co-Smads)结合，形成异源寡聚体复合物，随后进入细胞核内，调节目标基因。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人TGF-β1的浓度，其原理见图1。人TGF-β1特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人TGF-β1会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人TGF-β1抗体后，生物素化抗人TGF-β1抗体与人TGF-β1结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人TGF-β1浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人TGF-β1浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PT880-1	人TGF-β1抗体预包被板	8孔×12条
PT880-2	标准品稀释液(5X)	10ml
PT880-3	人TGF-β1标准品	2-4瓶
PT880-4	人TGF-β1生物素化抗体	10ml
PT880-5	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PT880-6	洗涤液(20X)	30ml
PT880-7	TMB溶液	10ml
PT880-8	1N HCl	3ml
PT880-9	1.2N NaOH	3ml
PT880-10	终止液	5ml
PT880-11	封板膜(透明)	2张
PT880-12	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
同种试剂盒不同批号的试剂盒组分不能混用，每批次试剂盒均经过独立测试。不同试剂盒相同名称的组分严禁混用，多个试剂盒同时检测时，注意避免混淆相同名称不同试剂盒的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。