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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
45
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
100T
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称:细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)规格
英文名称:
产品规格:100T
发货周期:1~3天
用途
检测细胞自噬
储存条件-20℃,避光,12个月
【培养指南】
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
第一种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
LY335979Apelin-C Terminus (human/mouse/rat) Elisa
PD98059APO A (Apolipoprotein)
NXY-059ASCA IgG, Elisa
Conivaptan HClASCA combi Elisa
Enzastaurin (LY317615)ASCA IgA Elisa
AprepitantASGPR - Anti-ASGPR Elisa
PosaconazoleASO Latex Agglutination Test (slides) (min. order EU 400)
TadalafilAspergillus fumigatus IgA
6-(4-Acetamido-1,8-naphthalamido)hexanoic acidAspergillus fumigatus IgG
Aliskiren HemifumarateAspergillus fumigatus IgM
细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)规格茴香(分析标准品,>(GC))英文名(EN)Dimethyl acetylenedicarboxylate,特价促销 规格(SP)5G
茴香(分析标准品,用于萜分析,≥99.5% (GC))英文名(EN)Ethyl chlorooxoacetate,98%特价促销 规格(SP)25G
活性炭(CP,200目,末状,褐色)英文名(EN)2Ethylhexyl nitrate,特价促销 规格(SP)250ML
活性炭(催化剂载体专用,86目)英文名(EN)Triethyl 1,1,2ethanetricarboxylate,特价促销 规格(SP)5G
活性炭(电镀脱色专用,200目,from wood)英文名(EN)Isopropyl acetoacetate,特价促销 规格(SP)25G
活性炭(电镀脱色专用,400目,from Nutshell)英文名(EN)tertButyl acetoacetate,98.0%特价促销 规格(SP)25G
活性炭(净水、气体化专用,104目)英文名(EN)Triethyl 2acetylcitrate,特价促销 规格(SP)100ML
活性炭(净水、气体化专用,棒,φ1.0mm)英文名(EN)4Nitrophenyl acetate特价促销 规格(SP)5G
活性炭(净水、气体化专用,棒,φ4.0mm)英文名(EN)Hexyl acetate,特价促销 规格(SP)100ML
活性炭(细胞培养级)英文名(EN)Ethyl 2butynoate,98.0%特价促销 规格(SP)1ML
活性炭(药物脱色,200目)英文名(EN)Ethyl 3oxohexanoate,≥98%特价促销 规格(SP)25G
活性炭(植物细胞培养级)英文名(EN)Ditertbutyl malonate,98%特价促销 规格(SP)10G
活性炭(200目,末状,褐色)英文名(EN)Methyl 3,5dimethoxybenzoate,特价促销 规格(SP)10G
活性炭颗粒(200目)英文名(EN)Methyl 3hydroxybenzoate,特价促销 规格(SP)25G
钬标准溶(1000µg/mL,体10%HCL)英文名(EN)γValerolactone,特价促销 规格(SP)25G
钬标准溶(1000μg/ml,溶剂1.0Mol/L HNO3)英文名(EN)δValerolactone特价促销 规格(SP)25ML
肌英文名(EN)Diisopropyl azodicarboxylate,特价促销 规格(SP)25G
肌盐盐英文名(EN)Dibenzyl azodicarboxylate,90%特价促销 规格(SP)5G
操作步骤(仅供参考):
1、细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)规格贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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文献和实验一、实验原理 细胞活力检测试剂盒(CCK-8) 可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。 其基本原理为:该试剂中含有WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】,在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法
一、检测原理 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中,没有活性;在细胞发生凋亡阶段,Caspase被激活,活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡。 Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被活化的Caspase剪切后,黄色
, 收集裂解液至离心管中,在振荡器上混匀4~15min,14000g离心15min(4℃),弃沉淀,用Bradford法或其它蛋白质测定方法测定上清中蛋白浓度以调整上样体积和上样量,进行 Western杂交时还需设置内或外参照,通常用beta-actin。 注意:一般上样20~30 μg已足够,如待检蛋白为低丰度蛋白,可加大上样量 至100μg,但电泳条带易拖尾,可制备亚细胞组份或采用更敏感的检测方法。 电泳分离(参照SDS-PAGE电泳方法) 转膜
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