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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
23
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
8ml/瓶/盒
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称:MASSON三色染色试剂盒(亮绿,用于胶原纤维染色)规格
英文名称:
产品规格:8ml/瓶/盒
发货周期:1~3天
Masson三色染色试剂盒主要用于结缔组织染色。用于判定各种组织、器官的病变程度与修复情况,以不同色调显示与区分某些非结缔组织及物质成分;如显示与区分肌肉及其肿瘤组织的正常或异常成分。尤适用于软组织肿瘤的鉴别诊断。
试剂盒组份
试剂A苏木素8.0ml
试剂B复合染色液8.0ml
试剂C磷钼酸8.0ml
试剂D亮绿染色液8.0ml
染色步骤
1.切片脱蜡处理至水。
2.滴加1滴(50~100μl)苏木素染色液(试剂A)染色5-10分钟。蒸馏水冲掉染液。
3.蒸馏水或自来水冲洗2-5分钟。
4.滴加1滴(50~100μl)复合染色液(试剂B)染色5分钟。
5.蒸馏水或自来水冲洗一下(2~3秒,冲掉染液即可)。
6.滴加1滴(50~100μl)磷钼酸(试剂C)染色1分钟。
7.甩干或自然晾干。
8.滴加1滴(50~100μl)亮绿染色液(试剂D)染色5min左右。
9.蒸馏水或自来水冲洗一下(2~3秒,冲掉染液即可)。
10.放入烘箱(50~60℃)烘干。中性树胶封片。
储存2~8℃,有效期12个月
【培养指南】
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
第一种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3-叔己二Vitamin B2 (Riboflavin)
2-嘧啶-5-Vitamin B6 (Pyridoxin)
酯Vitamin Biotin
异肉桂酯Vitamin C (Ascorbineacid)
3-Vitamin D binding Protein (VDBP) Elisa
L-2-Vitamin D, (1.25 Dihydroxy Vit. D) Elisa
3-氧Vitamin D, 1,25 Dihydroxyvitamin D Elisa
2-烟酰Vitamin D, 25 OH EIA
2-()嘧啶盐盐Vitamin D, 25 OH Vitamin D direct Elisa
2-羟啶Vitamin Folic Acid
MASSON三色染色试剂盒(亮绿,用于胶原纤维染色)规格Croverin英文名(EN)2Naphthaldehyde,98%特价促销 规格(SP)5G
CTAC;十六三化铵英文名(EN)1Naphthaldehyde,特价促销 规格(SP)25G
CTP.Na2;胞苷’三二盐英文名(EN)2,3Naphthalenedicarboxaldehyde特价促销 规格(SP)25MG
D 13223 (汀代谢产物)英文名(EN)2Hydroxynaphthaldehyde特价促销 规格(SP)25G
D 13223d4 (汀代谢产物) 英文名(EN)4(Dimethylamino)cinnamaldehyde,特价促销 规格(SP)1G
D()扁桃;R扁桃英文名(EN)DLGlyceraldehyde,≥90%特价促销 规格(SP)250MG
D()泛内 英文名(EN)Isovanillin,特价促销 规格(SP)5G
D()奎宁(标准品)英文名(EN)2Hydroxymethoxybenzaldehyde,98%特价促销 规格(SP)1G
D(+)二一水(>98%,BR)英文名(EN)2Hydroxymethoxybenzaldehyde,98%特价促销 规格(SP)1G
D(+)松二糖英文名(EN)5Hydroxymethylfuraldehyde,≥特价促销 规格(SP)1G
D(+)樟脑(>98.0%(GC))英文名(EN)Acetaldehyde,≥特价促销 规格(SP)100ML
D(十)无水葡萄糖(标准品)英文名(EN)Syringaldehyde,98%特价促销 规格(SP)5G
D,L福莫特罗D6 (主要的)英文名(EN)Acetaldehyde ammonia trimer,≥96.0%特价促销 规格(SP)25G
DAABDCl [=4[2(二)]7,1,3并恶二唑英文名(EN)pphthalaldehyde,特价促销 规格(SP)10G
dAMP;2’脱苷‘单英文名(EN)4Aminohydrazinomercapto,2,4t...特价促销 规格(SP)5G
dAMPNa2;脱苷二英文名(EN)Caproaldehyde,98%特价促销 规格(SP)100ML
DANSYLGCVLS英文名(EN)(E)Octenal,≥94%特价促销 规格(SP)5ML
DAPT (GSIIX)英文名(EN)Acetal,≥98%特价促销 规格(SP)25ML
操作步骤(仅供参考):
1、MASSON三色染色试剂盒(亮绿,用于胶原纤维染色)规格贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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文献和实验,则显均质性,具较强的的嗜酸性,在苏木素—伊红染色(简称HE染色)的切片上易于识别。但在某些情况下,它与肌纤维的鉴别是有困难的。例如纤维瘤或纤维肉瘤与平滑肌瘤或平滑肌肉瘤及横纹肌瘤及横纹肌肉瘤的鉴别。为此,适宜的采用某些特殊染色就十分必要了。如Ven Gieson氏染色法(胶原纤维呈红色,肌纤维呈黄色);Masson氏三色染色法(胶原纤维呈绿色或兰色,肌纤维呈红色)。 1.Ven Gioeson氏苦味酸复红法(1889) 此法是用来区分胶原纤维和肌纤
、Masson三色染色法 1.试剂配制 (1)Masson复合染色液 酸性复红1g,丽春红2g,桔黄G2g,0.25%醋酸300ml。 (2)亮绿染色液 高绿SF0.1g,0.2%醋酸100ml。 2.染色步骤 中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水。 (1)Masson复合染色液5min。 (2)0.2%醋酸水溶液稍洗。 (3)5%磷钨酸5-10min。 (4)0.2%醋酸水溶液浸洗2次。 (5)亮绿染色液5min,0.2%醋酸水洗2次。 (6)无水
、Masson三色染色法 1.试剂配制 (1)Masson复合染色液 酸性复红1g,丽春红2g,桔黄G2g,0.25%醋酸300ml。 (2)亮绿染色液 高绿SF0.1g,0.2%醋酸100ml。 2.染色步骤 中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水。 (1)Masson复合染色液5min。 (2)0.2%醋酸水溶液稍洗。 (3)5%磷钨酸5-10min。 (4)0.2%醋酸水溶液浸洗2次。 (5)亮绿染色液5min,0.2%醋酸水洗2次。 (6)无水
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