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- 2025年07月15日
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- 文献和实验
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59
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详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
250ml×3
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：快速瑞氏染液哪家好
英文名称：
产品规格：250ml×3
发货周期：1～3天
瑞氏染液主要应用于血液和骨髓涂片染色。
操作步骤
1.(选做)平置血涂片于染色架上，滴加甲醇固定液，室温固定15-30分钟。
2.吸去固定液，室温通风晾干。
3.将试剂一滴加到载玻片上，均匀覆盖住载片上血细胞，染色时间约为1分钟。等染液有变红的趋势时，迅速滴加两倍试剂一的量的试剂二。继续染色5到8分钟。
4.小股水流洗片，防止将大量的细胞从载片上冲落下来从而影响以后的观察。30s水洗结束后将载片放到阴凉处风干。
5.显微镜镜检。
染色结果
1.红细胞呈浅红色，中央稍淡而略有蝶形态。
2.白细胞系统清晰易分，细胞膜清晰呈紫黑色，细胞核着色呈深浅不同的紫红色，胞浆中各种颗粒区分明显。其中中性粒细胞浆中颗粒呈淡紫红色，嗜酸粒细胞浆中颗粒呈桔红色、嗜碱性粒细胞胞浆中颗粒呈蓝褐色。单核细胞的胞浆呈灰蓝色，胞浆中颗粒呈细小淡紫红色或蓝紫色。淋巴细胞胞浆呈淡蓝色。
注意事项
1.推片取全血3微升左右置载玻片上，将推玻片保持与载玻片30度角，置于血滴正前方，稍往后移与血滴接触，即可见血液沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面向前滑动，至血液铺完血膜为止。
2.涂片时不要太厚也不要太薄，太厚红细胞重叠并易皱，太薄时不易找到白细胞。
3.用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。血膜要干透后才能染色，否则染色时血膜易脱落。
4.试剂一及二染液不能过少，以防很快蒸发引起染液沉淀。试剂一不可少于400微升，试剂二是试剂一的1倍量。滴加试剂一及二时要轻摇玻片或用洗耳球对准血片吹气，使染液充分混合。
5.镜检时如果红细胞偏蓝，请放在蒸馏水中1-3分钟，直至红润为止。
6.染色过淡，可复染。染色过深，可用水冲洗或浸泡，还可用75%乙醇脱色3-5秒。
储存2～8℃，避光，有效期12个月。
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3--4-啶-N-物尿素测试盒/BUN测试盒
N-对酰甘尿胆原测试盒
苏合香酯尿胆红素测试盒
2,6-二嗪总胆红素、直接胆红素测试盒
-2-溴酯γ-谷酰转移酶测试盒/γ-GT测试盒
2--9,9-二芴谷草转酶测试盒/GOT/AST测试盒
Boc-L-焦谷酯谷转酶测试盒/GPT/ALT测试盒
3-羟啶测试盒(带标准)/PI测试盒(带标准)
N-Boc-3-溴钙测试盒(带标准)/Ca测试盒(带标准)
3-啉肝/肌糖元测试盒
快速瑞氏染液哪家好Bacto酵母浸(BD原装)英文名(EN)3(Methylthio)butanal,≥96%特价促销 规格(SP)10G
BAEE;NL精盐盐英文名(EN)2,4Heptadienal,90%特价促销 规格(SP)1G
Belinostat英文名(EN)2Bromopyridinecarboxaldehyde,特价促销 规格(SP)1G
BES free acid; N,N(2羟)英文名(EN)2Chloropyridinecarboxaldehyde,特价促销 规格(SP)1G
BES sodium salt; N,N二(2羟)英文名(EN)6Methylpyridinecarboxaldehyde,98%特价促销 规格(SP)1G
BEZ235 (Dactolisib)英文名(EN)6Methoxypyridinecarboxaldehyde,98%特价促销 规格(SP)1G
BGJ398(NVPBGJ398)英文名(EN)5Bromopyridinecarboxaldehyde,特价促销 规格(SP)1G
BGP；β甘油水合物(高)英文名(EN)6Bromopyridinecarboxaldehyde,特价促销 规格(SP)1G
BICINE；N,N二羟甘英文名(EN)trans,trans,4Decadienal,≥89%特价促销 规格(SP)1ML
Big CHAP(>98%，BR)英文名(EN)5Methylphenylhexenal,≥96%特价促销 规格(SP)10G
BML75 HCl,物质C盐盐英文名(EN)2Isopropylmethylhexenal,≥特价促销 规格(SP)10G
BMN73英文名(EN)transDecenal,≥95.0%特价促销 规格(SP)5ML
BMS 582664英文名(EN)3,5Dibromohydroxybenzaldehyde,98%特价促销 规格(SP)5G
BMS45541英文名(EN)LCarvone,特价促销 规格(SP)25G
BOC 精英文名(EN)Ethyl vanillin,≥98%特价促销 规格(SP)25G
BocArg(Mts)OH·CHA英文名(EN)transHexenal,98%特价促销 规格(SP)25ML
BOCD英文名(EN)2,6Dimethylheptenal,特价促销 规格(SP)25ML
BocD谷英文名(EN)trans,trans,4Nonadienal,≥89%特价促销 规格(SP)5ML
操作步骤(仅供参考)：
1、快速瑞氏染液哪家好贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
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2.吸去固定液，室温通风晾干。
3.将试剂一滴加到载玻片上，均匀覆盖住载片上血细胞，染色时间约为1分钟。等染液有变红的趋势时，迅速滴加两倍试剂一的量的试剂二。继续染色5到8分钟。
4.小股水流洗片，防止将大量的细胞从载片上冲落下来从而影响以后的观察。30s水洗结束后将载片放到阴凉处风干。
5.显微镜镜检。
染色结果
1.红细胞呈浅红色，中央稍淡而略有蝶形态。
2.白细胞系统清晰易分，细胞膜清晰呈紫黑色，细胞核着色呈深浅不同的紫红色，胞浆中各种颗粒区分明显。其中中性粒细胞浆中颗粒呈淡紫红色，嗜酸粒细胞浆中颗粒呈桔红色、嗜碱性粒细胞胞浆中颗粒呈蓝褐色。单核细胞的胞浆呈灰蓝色，胞浆中颗粒呈细小淡紫红色或蓝紫色。淋巴细胞胞浆呈淡蓝色。
注意事项
1.推片取全血3微升左右置载玻片上，将推玻片保持与载玻片30度角，置于血滴正前方，稍往后移与血滴接触，即可见血液沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面向前滑动，至血液铺完血膜为止。
2.涂片时不要太厚也不要太薄，太厚红细胞重叠并易皱，太薄时不易找到白细胞。
3.用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。血膜要干透后才能染色，否则染色时血膜易脱落。
4.试剂一及二染液不能过少，以防很快蒸发引起染液沉淀。试剂一不可少于400微升，试剂二是试剂一的1倍量。滴加试剂一及二时要轻摇玻片或用洗耳球对准血片吹气，使染液充分混合。
5.镜检时如果红细胞偏蓝，请放在蒸馏水中1-3分钟，直至红润为止。
6.染色过淡，可复染。染色过深，可用水冲洗或浸泡，还可用75%乙醇脱色3-5秒。
储存2～8℃，避光，有效期12个月。
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
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产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
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细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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BGP；β甘油水合物(高)英文名(EN)6Bromopyridinecarboxaldehyde,特价促销 规格(SP)1G
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BMS 582664英文名(EN)3,5Dibromohydroxybenzaldehyde,98%特价促销 规格(SP)5G
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BocArg(Mts)OH·CHA英文名(EN)transHexenal,98%特价促销 规格(SP)25ML
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操作步骤(仅供参考)：
1、快速瑞氏染液哪家好贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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文献和实验相关实验
1. 实验原理 染色单体或染色体的无着丝点断片，或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期，仍然遗留在细胞质中。末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在子细胞的胞质内，因比主核小，故称为微核。大小应为主核的1/20～1/5。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样。微核率是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关，所以可用简易的、快速、灵敏的微核计数来代替繁杂的畸变染色体计数。Matter 和Schmid建立的微核测试是一种比较理想的方法，目前国内
细胞皱缩。同时血膜干燥后, 最好立即固定染色, 避免细胞遭受污染而使之溶解, 久放后效果不佳; 血膜片要求: 血膜均匀, 薄如蝉翼, 尾端形如弧状, 血膜具有头体尾不同厚薄区域。注意考虑患者的血液状态, 如贫血程度, 血液黏稠度, 白细胞或有核细胞多少等因素, 调整推片技巧。 4 血涂片染色 目前市售瑞氏快速染液对观察细胞形态快而清晰, 但是染液往往破坏红细胞, 因此必须用传统的瑞氏染液先覆盖在血膜上, 再加入快速瑞氏染液, 最后加入缓冲
1. 实验原理 染色单体或染色体的无着丝点断片，或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期，仍然遗留在细胞质中。末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在子细胞的胞质内，因比主核小，故称为微核。大小应为主核的1/20～1/5。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样。微核率是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关，所以可用简易的、快速、灵敏的微核计数来代替繁杂的畸变染色体计数。Matter 和Schmid建立的微核测试是一种比较理想的方法，目前国内外已把微核测试用于辐射损伤、化学
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