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- 百奥莱博
- MQ0068-JDW
- 北京
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
424
- 英文名：
NMY51 Chemically Competent Cell
- 保质期：
三个月
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
10×100μl/50×100μl
特别提示：包括NMY51酵母感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：NMY51酵母感受态细胞
英文名称：NMY51 Chemically Competent Cell
产品货号：MQ0068
产品规格：10×100μl/50×100μl
DUALmembrane系统是专门筛选跨膜蛋白间相互作用的检测技术，它利用分离的泛素系统(split-ubiquitin)直接检测天然状态下膜蛋白间的相互作用，是目前市面上唯一检测膜蛋白间相互作用的酵母双杂系统。
此系统采用NMY51酵母菌株，可直接转化质粒进行蛋白互作验证或筛库试验；此菌株Transformation marker为：trp1，leu2-3，报告基因为：HIS3，ADE2和lacZ，第一步通过营养缺陷型报告基因(HIS3，ADE2)进行选择性生长筛选，进一步通过LacZ报告基因进行β-半乳糖分析显色的定量或半定量筛选，三个独立的报告基因，受不同启动子的调控，降低假阳性几率。
原理：泛素(ubiquitin)分子量很小，由76aa 残基组成；泛素作为降解信号分子，可以连接另外一种蛋白质的N端，然后被泛素专一性蛋白酶(UBPs)识别，从而导致与泛素相连的蛋白被酶解。
泛素可以人为分成两部分：N端(Nub)，C端(Cub)。首先，人为地将泛素Nub的3位异亮氨酸突变为甘氨酸(NubI突变为NubG)。这样与Cub的亲合力大大降低，避免了Cub和Nub自我结合或接近的可能性。其次，将Cub部分与人工合成的LexA-VP16转录激活因子融合成一个融合蛋白Cub-LexA-VP16。
正常条件下NubG不与Cub结合，UBPs也不能识别分离的泛素，转录激活因子也不会被切下来。最后，将要检测的蛋白质分别与NubG和Cub融合，形成bait融合蛋(bait-cub-LexA-VP16)和prey融合蛋白(prey-NubG)。
如果bait和prey发生相互作用，就会促使NubG和Cub的相互接近，被 UBPs识别，导致LexA-VP16的解离，进入核内，从而激活报告基因的转录。
此系统可使用四种Bait质粒：pBT3-N，pBT3-SUC，pBT3-STE，pBT3-C，筛选标志均为LEU；三种Prey质粒：pPR3-C，pPR3-SUC，pPR3-STE，筛选标志均为TRP。NMY51感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，经PGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃
基因型：
MATahis3200trp1-901leu2-3,112ade2LYS2::(lexAop)4-HIS3ura3::(lexAop)8-lacZade2::(lexAop)8-ADE2 GAL4
操作说明：
1.取100 μl冰上融化的NMY51感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5μg，Carrier DNA(95-100度5min 快速冰浴，重复一次)10 μl，PEG/liAC 500μl并吸打几次混匀，30度水浴30分钟(15 min时翻转6-8次混匀)。
2.将管放42度水浴15min(7.5 min时翻转6-8次混匀)。
3.5000 rpm离心40s弃上清，ddH2O 400μl重悬，离心30s弃上清。
4.ddH2O 50μl重悬，涂板,29℃培养48-80h。
注意事项：
1.感受态细胞最好在冰上融化。
2.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3.同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
4.NMY51酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
5.酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆。
我公司销售的NMY51酵母感受态细胞北京价格，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验开始做酵母双杂交了，计划用一个膜蛋白去筛库，已经做好了工作量大，而预期结果要靠点小运气的心理准备，面前真是一条很长的路要走！ 在丁香园学习了很久，希望能将我这次试验过程中遇到的困难和思索记录下来，跟大家一同讨论，共同学习。 今天先说说实验之前的试剂准备，为了保证实验能顺利进行，我选择了clontech的matchmaker gold系统，订购了人脑cDNA文库（标准化的），还有培养基也是订的商品化的，再有一个提酵母质粒的KIT 1，GOLD系统式对系统3的升级版，替换了一个报告
技术公司； 5) 葡萄糖、半乳糖，AMERSCO进口分装，广州博理生物科技公司； 6) 限制性内切酶Bam H I、Xba I，大连宝生物工程公司； 7) 各类氨基酸，AMRESCO进口分装，广州博理生物科技有限公司； 8) YNB（Yeast Nitrogen Base），酵母氮碱，Bebco公司； 9) 低分子量蛋白质标准（14.4 kD～94.0 kD，5 bands），北京天为时代科技有限公司； 10
Raf 蛋白 Ras 结合结构域的简并进化库合成以及利用片段互补法快速筛选二氢叶酸还原酶的快速折叠且稳定的克隆
( Millipore，MAVM 096 OR)。 ( 7 ) 质粒文库（IDT) 特异测序引物。 2.6 蛋白质纯化 ( 1 ) 合适的限制性内切核酸酶（对这个例子是 SalI 和 XhoI）和连接所需试剂（见 15.2.2)。 ( 2 ) BL21 pREP4 感受态细胞和含 100 μg/ml 氨芐青霉素和 25 μg/ml 卡那霉素的 LB 培养基。 ( 3 ) Terrific broth ( TB) 培养基（12 g 蛋白胨、24 g 酵母粉、4 ml 甘油、2.31
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