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本山羊血清(Goat Serum)是碧云天自产的血清,可以用于细胞培养、免疫荧光和免疫组化时的封闭等。
本山羊血清采自健康山羊,经无菌采集、批量混合,最终过3次0.1μm过滤分装而成。所有操作符合2010版GMP (Good
Manufacturing Practices for Drug)生产标准。
本产品无细菌、真菌、支原体及病毒污染,具有高质量和高稳定性。
本山羊血清为纯·天然制品,不含任何人为的添加成分,适用于科研或诊断试剂生产用。可以替代FBS用于大多数细胞系和原代细胞培养,也可用于病毒的培养和研究、鱼类细胞的培养、免疫反应中的封闭和稀释液的制备。
不同血清产品的比较、选择和使用技巧,请参考http://www.beyotime.com/support/serum.htm。
本产品通过了碧云天的细胞培养和免疫染色(包括免疫荧光和免疫组化)封闭效果测试。
包装清单:
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| C0265 | 山羊血清 | 50ml |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-15 ~ -40℃保存,5年有效;4℃保存通常不宜超过1个月。
注意事项:
如果不能短期内使用完毕,解冻后请适当分装。血清结冰时体积会增加约10%,因此在分装血清时须使分装瓶预留一定体积空间,否则易导致分装瓶冻裂而发生污染。
热灭活是指56℃,30分钟加热已完全解冻的血清。加热过程中需有规则地摇晃均匀。热处理的目的是灭活血清中的补体(complement)。除非必须,一般不推荐对血清进行热处理。因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量。补体参与的反应有:细胞毒作用、平滑肌细胞收缩、肥大细胞和血小板释放组胺、增强吞噬作用、促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化等。
瓶装血清解冻需采用缓慢解冻法:把在-15 ~ -40℃低温冰箱中保存的血清放入4℃冰箱中解冻约1天,待全部解冻后再分装。在解冻过程中每隔约2小时可轻轻摇晃均匀(尽量避免产生气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃或更低温度进入37℃水浴解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀,从而使用血清的质量下降。
血清中的絮状沉淀物主要是解冻后血清中纤维蛋白及4℃长时间保存后血清中的脂蛋白变性造成的,这些絮状物不会影响血清本身的质量,可不用处理。如果必须要处理,可400g离心5分钟去除。但不宜过滤去除,因为絮状物可能阻塞滤膜。
经过热处理的血清中沉淀物会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察像“小黑点”,而且由于这些“小黑点”的布朗运动在显微镜下被放大,感觉是在游动,所以经常被误认为血清被微生物污染。通常这些小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清存在微生物污染,则应立即停止使用,更换另一批次的血清。可将适量血清用培养液稀释至10%浓度后培养1-3天,观察小黑点是否急剧增多,或取适量血清在LB平板上涂板培养观察是否产生菌落,以确定是否存在微生物污染。
请勿将血清在37℃放置过长时间,否则血清会逐渐变浑浊,同时血清中的有效成分也会逐渐失活而影响血清质量。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验一、SP 法 1)脱蜡、水化;2)PBS 洗 2~3 次各 5 分钟;3)3% H2O2(80% 甲醇)滴加在 TMA 上,室温静置 10 分钟;4)PBS 洗 2~3 次各 5 分钟;5)抗原修复;6)PBS 洗 2~3 次各5分钟;7)滴加正常山羊血清封闭液,室温 20 分钟。甩去多余液体。8)滴加Ⅰ抗 50μl,室温静置 1 小时或者4℃过夜或者37℃1小时。9)4℃ 过夜后需在37℃复温45分钟。10)PBS 洗 3 次各 5 分钟;11)滴加 Ⅱ 抗 40~50 μl,室温
, 轻轻漂洗干净。 第三步:免疫荧光染色 视网膜置于3 g· L-1TritonX-100中4 ℃孵育1 h;从TritonX-100中取出后滴加山羊血清室温封闭抗原2 h, 吸去封闭液, 不洗。水浴箱孵育a-SMA单克隆抗体(1:100, 1 g· L-1TritonX-100稀释)37 ℃,3 h。滴少许抗荧光淬灭剂封片, 于荧光显微镜490 nm波长下观察。 操作要点 推挤出视网膜后,建议用眼科手术刀将视网膜切开而不推荐剪刀剪,因为眼科剪较厚,容易将视网膜挤压变形,当然熟练
缓冲盐水 (10X TBS):在 800 ml 蒸馏水中加入 24.2 g 三羟甲基氨基甲烷(Trizma base, C4 H11NO3)和 80 g 氯化钠(NaCl)。用浓盐酸将 pH 调节到 7.6,定容至 1 L。6. 抗体稀释液a. SignalStain? 抗体稀释液 #8112b. TBST / 5% 正常山羊血清: 5 ml 1 X TBST 中添加 250 ?l 正常山羊血清。c. PBST / 5% 正常山羊血清: 5 ml 1 X PBST 中添加 250 ?l 正常山羊血清
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