鸭乙肝表面抗原(HBsAg)检测ELISA试剂盒

鸭乙肝表面抗原(HBsAg)酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用       目的：本试剂盒用于检测鸭血清，血浆样本中乙肝表面抗原(HBsAg)水平。
实验原理：
  本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中鸭乙肝表面抗原(HBsAg)。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中乙肝表面抗原(HBsAg)相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中鸭乙肝表面抗原(HBsAg)的存在与否。

试剂盒组成：

试剂盒组成	48孔配置	96孔配置	保存
说明书	1份	1份
封板膜	2片（48）	2片（96）
密封袋	1个	1个
酶标包被板	1×48	1×96	2-8℃保存
阴性对照	0.5ml×1瓶	0.5ml×1瓶	2-8℃保存
阳性对照	0.5ml×1瓶	0.5ml×1瓶	2-8℃保存
酶标试剂	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
显色剂A液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
显色剂B液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
终止液	3ml×1瓶	6ml×1瓶	2-8℃保存
浓缩洗涤液	（20ml×20倍）×1瓶	（20ml×30倍）×1瓶	2-8℃保存

样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤：

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。待测样品孔中加待测样本50μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，
3. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
5. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用
6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
7. 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟
8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

结果判定：
  试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.20
  临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
  阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为鸭乙肝表面抗原(HBsAg)阴性
  阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为鸭乙肝表面抗原(HBsAg)阳性
注意事项
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm
7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。

保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
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