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VA-044
用于脂质提取的聚合物引发剂
一个世纪以来，生物学家们一直梦想着能够透过器官甚至整个机体，亲眼看到细胞连接和精细结构，现在随着组织透明化技术的完善，这一梦想终于成为了现实。
◆原理
VA-044 作为组织透明化技术中起关键作用的水溶性偶氮引发剂，普遍适用于高分子合成的水溶液聚合与乳液聚合。在CLARITY 方法中，VA-044 作为引发剂，催化丙.烯酰胺、甲叉双丙.烯酰胺和PFA 形成水凝胶。
2013 年3 月，斯坦福大学的Karl Deisseroth 博士领导的团队在自然杂志（Nature）上发表了Structural and molecularinterrogation of intact biological systems 的论文，文中介绍了制备组织的方法CLARITY。该方法是将组织浸透在水凝胶单体溶液中（Hydrogel Monomer Solution）中，经电泳使组织呈现透明。这种水溶胶—组织杂交的方式可以维持组织的原有结构，使生物分子结合到水凝胶的网孔上。重要的是脂类不会结合到水凝胶上，因而可以通过这种方式将脂类有效去除。通过这种方法制备的组织样品可用于后期的影像实验，免疫染色，原位杂交等实验。
CLARITY可用于荧光蛋白质和抗体的免疫染色，可作为解析脑神经回路的有效工具。VA-044是论文实验步骤中透明化工程的使用试剂。
◆特点• 优势
● 操作简单，固定蛋白后只需进行电泳；
● 可保持组织、器官和全身结构的完整性；
● 可进行原位杂交和免疫组化实验，可进行多轮染色和脱色步骤；
◆案例•应用
Clarity 介绍
PARS 介绍
2014 年7 月，加州理工学院的研究团队在细胞杂志（Cell）上发表论文Single-Cell Phenotyping within TransparentIntact Tissue through Whole-Body Clearing，将CLARITY 技术推进到一个新的高度——全身组织透明化技术，称为PARS(Perfusion-assisted Agent Release in Situ)。这种技术将透明剂持续泵入动物的循环系统从而进入各个组织，或者通过脑脊液管道泵入大脑，再去除脂质，使器官和生物体被高分子渗透而呈现透明，并可用荧光抗体分析和揭示具有完整连接性的细胞结构和三维细胞排列。
| 图A. PARS 建立的小鼠透明化肠，并用凝集素（lectin） 亚甲基蓝(methylene blue)、DAPI 进行免疫标记后成像 并获得三种免疫标记的叠加图（merge） |
图B. PARS 建立的小鼠透明化肾脏并用抗微管蛋白抗体 和DRAQ5 进行免疫标记后成像，并获得两种免疫 标记的叠加图 |
CLARITY处理的小鼠脑
CLARITY处理的小鼠大脑成像
CLARITY处理的Thy1-YFP（H Line）小鼠大脑的荧光观察
（A）从大脑皮质到海马的3-D观察图像
（B）大脑皮层Ⅴ层的锥体细胞的树突图像
拍摄条件：双光子 使用设备：Olympus FV1000直立显微镜，25倍浸液物镜
CLARITY+抗体处理的小鼠大脑成像
CLARITY处理后，用Iba1抗体染色Thy1-YFP（H线）小鼠大脑的荧光观察
（A）在大脑皮质的小胶质细胞的3-D观察图像
（B）从表面层观察皮质Ⅰ层的图像
拍摄条件：单光子 使用设备：Olympus FV1000直立显微镜，25倍浸液物镜
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文献和实验溶剂可以提取脂质或减少折射率的变化 [4, 5, 16]，但同时会猝灭荧光，从而限制了成像时间。此外，BABB 中天然荧光的不稳定性限制了精细神经元投射或其他易于淬灭的信号的成像。所以 BABB 等有机法由于上述缺点如今已不常使用。5. iDISCO+iDISCO+是基于 DISCO 和 3DISCO 方法的改进版本（图 6）。iDISCO+也是一种用化学试剂浸泡使组织透明的方法，与之前介绍的方法不同的是，iDISCO+先对组织进行脱水和免疫染色，之后再清除组织中的脂质使组织透明（图 7）。先用甲醇梯度
Sci Adv：张华团队阐明成年卵巢血管新生模式并提出延缓生殖衰老新策略
博士为第一作者)。该研究系统地揭示了成年卵巢血管新生的发育模式和时空变化规律，并明确了生长卵泡为卵巢血管新生的发生中心；而基于卵巢中血管新生的发育模式，该研究进一步设计了利用血管新生抑制药物干扰卵巢血管新生，进而暂停卵巢发育并减缓卵巢储备消耗的策略，从而达到延缓雌性动物的卵巢衰老并延长雌性小鼠生殖寿命的目的[2]。 在该研究中，张华团队利用内源荧光报告小鼠高保真的特性[3]，结合组织透明化技术[4] 以及高分辨成像技术，构建了在器官尺度下达到单细胞分辨率的卵巢组织 3D 成像系统（图 1）。利用
之一。 ProMedDx在世界范围内销售病理组织及血浆，极大的推动了临床诊断及生物标记物的研究。目前以收藏了几百病例上万样品。这些样品的引进会很大成度上帮助中国的疾病的临床诊断研发，诊断产品的市场化。 博慧斯公司一直专注于生物诊断技术的发展，自主研发并积极代理各种生物医药诊断标本和诊断试剂。这次于ProMedDx公司签订代理合同，引进相应的品种，希望能够为国内诊断技术的发展做出贡献。 PathoTech环保组织透明液是我公司研发的新型绿色环保试剂，它能替代二甲苯应用在细胞学和组织病理学领域的制片和染色过程中
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