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55
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详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
1mg|5mg
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称:JC-1线粒体膜电位荧光探针价格
英文名称:
产品规格:1mg|5mg
发货周期:1~3天
JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm的理想荧光探针。可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。在线粒体膜电位较高时,JC-1聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,可以产生红色荧光;在线粒体膜电位较低时,JC-1不能聚集在线粒体的基质中,此时JC-1为单体,可以产生绿色荧光。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降,同时也可以用JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
JC-1单体的最大激发波长为514nm,最大发射波长为529nm;JC-1聚合物的最大激发波长为585nm,最大
JC-1用于检测细胞的线粒体膜电位时常用的浓度范围为1~20μg/mL,对于很多细胞适宜采用的JC-1浓度为10μg/mL。
别名JC-1荧光探针
CAS号3520-43-2
分子式C25H27Cl4IN4
分子量652.23
纯度≥95%(HPLC)
储存条件-20℃干燥避光
【培养指南】
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
第一种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
2,4-二-3,5-二胶原蛋白I型
代单基锡酸H33258荧光染料
2,4,6-三基-3-烯-1-;异环柠檬5-胞苷/5-杂胞嘧啶核苷/5-杂胞苷/阿托胞苷/阿扎胞苷/胞苷/杂胞苷
酸异酯基蓝/酸性水溶天蓝
酸异辛酯隐色结晶紫
N-(苄氧羰基)-1H-唑-1-脒2,4-二
2-基烟酸酯隐色孔雀石绿
2-基异烟酸酯石复红
2,3,5-三溴亮蓝/酸性蓝9
2-异基酰酸酯钙镁试剂
JC-1线粒体膜电位荧光探针价格糖蛋白蛋白化试剂盒(见关联产品) 规格HPLC≥95%;20mgProcyanidin B1
细胞表面蛋白分离试剂盒 规格HPLC≥98%;20mgProcyanidin B2
细菌膜蛋白质微量提取试剂盒 规格HPLC≥98%;20mgProtopanaxdiol
细菌总蛋白质微量提取试剂盒 规格HPLC≥98%;20mgProtopanaxatriol
脂蛋白化试剂盒(见关联产品) 规格HPLC≥98%;20mgProtodioscin
重组蛋白化 规格HPLC≥98%;20mgProtogracillin(p)
CM交换介质 规格HPLC≥98%;20mgTelocinobufagin
DEAD交换介质 规格HPLC≥98%;20mgPolygalaxanthone III
HRP标记的抗His标签兔多克隆抗体 规格HPLC≥98%;20mgPolygalacic acid
HRP标记的兔抗GST标签多抗 规格HPLC≥95%;20mgOnjisaponin A
L-谷胱甘肽(还原型) 规格HPLC≥98%;20mgOnjisaponin B; Senegin III
L-谷胱甘肽(还原型) 规格HPLC≥98%;20mgSenegenin
n-十二基β-D-麦芽糖苷 规格HPLC≥98%;20mgNarirutin
Protein A+G 琼脂糖凝胶 规格HPLC≥98%;10mgcroceic acid
Protein A磁珠(见关联产品) 规格HPLC≥98%;20mgAlisol A 24-acetate
操作步骤(仅供参考):
1、JC-1线粒体膜电位荧光探针价格贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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文献和实验一、线粒体膜电位检测原理 线粒体膜电位下降是细胞凋亡早期的标志性事件,发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体膜电位崩溃,细胞凋亡便不可逆转。 JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位∆Ψm的理想荧光探针,可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。JC-1有单体和多聚体两种存在状态,两者发射光谱不同。在正常细胞内,线粒体膜电位较高,JC-1聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,可产生红色荧光;凋亡早期,线粒体膜电位降低,JC-1不能聚集在线粒体基质中,此时JC-1为单体
染料的浓度,引起假去极化。荧光探针JC-1是一种阳离子型的亲脂性染料,能够自由穿过细胞膜,随细胞膜电位的变化而在膜两侧保持动态平衡。其特点是线粒体膜电位低时浓度低,主要以单体形式存在,488nm激发时最大发射波长为527nm,呈绿色荧光,胞浆相对线粒体为低电位,形成流式图中所有细胞FL1均为阳性;膜电位高时浓度高形成聚集体,488nm激发时的最大发射波长为590nm,红色荧光。活细胞线粒体膜电位高,线粒体内JC-1聚集体的浓度高,红色荧光很强,在流式图上表现为FL1和FL2双阳性,而凋亡细胞则大多
线粒体膜势能的检测 线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用,多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡,而线粒体跨膜电位DYmt的下降,被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件,它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体DYmt崩溃,则细胞凋亡不可逆转. 线粒体跨膜电位的存在,使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine 123、3,3-Dihexyloxacarbocyanine iodide[DiOC6(3)]、Tetrechloro
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