使用说明: 1. 试剂准备:将所有试剂取出,恢复至室温使用。 a. 显色底物溶液:取一管显色底物,溶解于2.5ml的检测缓冲液中,充分溶解和混匀,冰上放置。新鲜配制的显色底物溶液需在6小时内使用。 b. 标准品工作液:取10μl p-nitrophenol溶液(10mM),用检测缓冲液稀释至0.2ml,最终浓度为0.5mM。 2. 样品准备: a. 细胞或组织裂解液的准备:采用适当细胞或组织裂解液裂解细胞或组织,建议使用信裕生物的P0013J Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)裂解相关样品。如果有必要需进行适当匀浆,随后离心取上清,用于酸性磷酸酯酶的检测。注意:裂解液中不能含有磷酸酶抑制剂。样品可以-80℃冻存,但需避免反复冻融。 b. 血浆、血清和尿液的准备:血浆和血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,但为了消除样品本身颜色的干扰,需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。尿液通常也可以直接用于测定。上述样品可以-80℃冻存,但需避免反复冻融。 c. 样品的稀释:如果样品中含有较高活性的酸性磷酸酶,可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释,也可以采用试剂盒中的检测 缓冲液进行稀释。如果使用试剂盒中提供的检测缓冲液进行稀释,需注意保留足够的检测缓冲液用于试剂盒的检测过程。 3. 参考下表使用96孔板设置空白对照孔、标准品孔和样品孔。标准品的用量分别为4、8、16、24、32和40微升,样品通常可以直接加40微升。如果样品中的酸性磷酸酯酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔或三复孔。