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猫星形脑胶质细胞哪家好

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  • 上海谷研
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  • 2025年07月15日
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      上海谷研

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    • 英文名

      PG-4 (S+L-)

    • 规格

      详见说明书

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    产品名称 猫星形脑胶质细胞哪家好
    种属 PG-4 (S+L-)
    价格 来电可享受优惠

    资源名称 猫星形脑胶质细胞
    种属:PG-4 (S+L-)

    类型:贴壁生长
    形态:胶质、星形细胞样,CM5-1培养液中,贴壁,成纤维细胞样,长条形
    提供形式:复苏形式:T25培养瓶1瓶;或者冻存形式:2ml冻存管2支,干冰费另计。
    安全等级:1
    模式菌株:未知
    培养方法
    传代方法:将旧培养液吸除,PBS清洗两遍后,加入6mL(/100mm皿)胰酶,在显微镜下观察,期间禁止摇晃培养皿,细胞刚有脱落时,则吸除大部分胰酶,留约0.5mL,移至培养箱消化,约3min取出。传代用12mL CM5-1培养液终止消化,轻轻吹打均匀细胞,后可分3~6皿培养;
    生长条件:37℃,5%CO2,CM5-1培养液。CM5-1培养液:90%Mc Coy’s 5a+10%FBS。Mc Coy’s 5a:Mc Coy’s 5a培养液。
    存储条件:冻存则用6mL冻存液(90%FBS+10%DMSO)终止消化,吹打均匀,分为6支冻存管,用程序降温盒于-80℃冻存,过夜转移至液氮中保存。
    收到细胞后,在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况:
    (一)如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,换 10ml新鲜培养液后继续培养。
    (二)如果细胞已长满,即可进行传代培养。
    猫星形脑胶质细胞哪家好具体步骤如下:
    1. 弃去培养液,用PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次。
    2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,倒放于37℃培养箱1-3分钟预热,之后翻转培养瓶10-30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。
    3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基,轻轻打匀后吸出一半,分到新的培养瓶中。
    注意事项:
    1. 整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作。 
    2. 反应完毕后请尽快检测,反应1 小时后荧光强度就开始衰变。 
    3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质,在操作时请注意避光。 
    4. 试验操作过程中佩戴手套等防护用品。 
    5. 试验开始前将一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超纯水(1:9)稀释至 1×备用。

    产品细节图片2
    实验材料: 
    1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶 
    2. 100ml灭菌烧杯2个; 人皮肤成纤维细胞,CCC-HSF-1细胞
    3、50ml离心筒2个 
    4、灭菌培养皿1个,细胞培养瓶1个 
    5、1ml ,200μl移液器各1支;枪头盒2个;无菌玻璃搅拌棒1个 
    6、细胞计数板1块; 
    7、灭好菌的镊子1把,剪刀1把; 
    8、酒精灯1台; 
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    猫星形脑胶质细胞哪家好产品规格:200ml

    发货周期:1~3天
    人淋巴细胞分离液采用优质原料科学配方配制而成。适用于从血液及组织匀浆中分离所需细胞。本品为无菌溶液。
    储存条件:室温(18-25℃)避光保存。
    开封后 2-8℃保存。
    有效期:两年。
    使用方法:
    由于各离心机的性能差异以及实验室的温度不同,佳分离条件(离心转速、离心时间等)请根据实际摸索。
    1.取新鲜抗凝血 1ml,与1ml Hank’s液混匀。
    2.将以上液体小心加于 1ml的细胞分离液的液面上。
    3.以 1500RPM离心15分钟。

    实验报告:
    一、分离与培养:
        1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
        2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
        3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
        4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
        5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
    二、免疫荧光鉴定:
        1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%在室温条件下固定细胞15min;
        2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
        3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
        4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
        5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
        6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。


     

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