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上海邦景
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低温冷藏
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30T
英文名称:
产品规格:30T
发货周期:1~3天
抗酒石酸酸性磷酸酶主要存在于正常人肺泡巨噬细胞等部位的TRAP和存在于细胞白血病人脾脏TRAP 均在细胞滤泡中,并不释放入血液,血液中TRAP 绝大部分来源于破骨细胞。因而测量血液中TRAP可以了解破骨细胞的功能状态。
在碱性的缓冲液中,细胞内酸酸性磷酸酶催化底物水解,其生成物进而与一种稳定的重氮盐偶联,生成不溶性的偶氮染料沉淀,当底物中存在酒石酸时,该反应只出现在特异性细胞中。
本试剂盒适用于细胞涂片、细胞爬片、血涂片、骨髓涂片、冰冻切片及石蜡切片等的染
使用方法:
1. 悬浮细胞,2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎,造成假阳性,过短,细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶消化液,加入细胞培养液终止消化,2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS,洗涤细胞2次(2000rpm x 5min),收集细胞2~5×105 。
3. 离心弃上清,加入500μL结合缓冲液,轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许,可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。
细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
四正丁基化shēng huà shì jì容量:100克
10,6二录醌4录亚胺2,6Dichloroinoneone4chloroimide
BOCD丝酸5克RT
2苄氧基本醋98+% 2BqNZYLOXYPHqNYLcCqTIC cCID 0887
胃蛋白酶抑制剂25克RT
酸性肉汤shēng huà shì jì容量:10克
(先锋霉素I)
BOCD色酸25克
2.2’联麸酰基二肟 cLPHcFURIL DIOXIMq 270
D(+)松三糖 D(+)MqLqZITOSq 29
DirectBlack直接EX25克生物技术级,98%
6363537麦芽糖一水合物D(+)Maltose monohydrate
TYGPNMEDIUMBROTHTYGPN 培养基肉汤生物技术级浅米黄色粉末RT不sigma
1,4,5,8四加醋二酐 1,4,5,8ncphclqnqtqtrcccrboxylic dicnhydridq 801
基炳醋共聚物A型 Mqthccrylic ccid CopolyMqr Typq c 2086//1
人导管癌细胞 英文名称: MDA-MB-435S
人腺癌细胞 英文名称: MDA-MB-436
人癌细胞 英文名称: MDA-MB-453
人癌细胞 英文名称: MDA-MB-468
TRAP染色试剂盒价格人正常肝细胞;L-02
人成纤维细胞RNAHMF miRNA5 μg
KLRK1 Others Human 人 NKG2D / CD314 / KLRK1 CHO细胞裂解液 (阳性对照)
兔源细胞 长鼻袋鼠肾细胞,Pt K1细胞 RBL-1细胞,大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞
MLF, 小鼠淋巴成纤维细胞
HA Others H16N3 甲型流感 H16N3 (A/black-headed gull/Sweden/5/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照)
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
注意事项:
TRAP染色试剂盒价格尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验韶光逐浅 我想问一下Hoechst凋亡染色试剂盒国产的哪个公司的好啊? yunitongxing 原装进口试剂 韶光逐浅 好的,多谢啦 本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴 师兄微信号:shixiongcoming
的是Lorch的Gomori法。本实验使用的是同时采用偶氮染色法和偶联反应法的TRAP/ALP染色试剂盒(和光纯药,产品编号294-67001)。关于切片的厚度,Lorch建议为8μm,同时也研究过普通的4μm切片是否能染色、双重染色的顺序应该先染TRAP和ALP中的哪一个、封片剂是否必须选水溶性封片剂等问题。染色法的结果是偶氮染色法中,切片过厚就会有酶扩散现象,即骨基质的TRAP染色倾向染成红色。即使是4μm的切片,只要增强了反应条件(反应温度及反应时间),也能充分染色。也就是说,TRAP染色反应
案例一:DAB染色后切片着色一片黄/背景深 背景:奥运会期间我们课题组研究生都在实验室做实验,许多从北京购买的试剂买不到,对我们的许多实验产生了很大的影响。 我以前一直用中杉金桥的Sp三步法染色试剂盒,效果不错,在奥运会期间我准备做同批实验分不同批次酶免疫组化实验,第一批组化实验结果很好,抗体浓度感觉比较合适(Santa Cruz公司1:200),等做第二批时发现封闭血清不够了,为了保证实验顺利进行,我又从福州迈新顶了一个SP试剂盒,同时抗体稀释液也不够了,我又重新从博士
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