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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
10
- 英文名:
Yersinia pseudotuberculosis
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件:
负20度
Yersinia pseudotuberculosis
规格:50次
产品及特点
本产品包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液,浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可最大限度的减少人为误差。使用时只需加入DNA模板和引物既可。使用方便快捷,能避免PCR操作过程中的污染,使用时只需取适量2×TaqPCR MasterMix溶液,加入模板和引物,并加入去离子水补足体积,使MasterMix溶液浓度为1×即可进行反应。使用前请保证充分溶解并混匀,操作需在冰上进行。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的试剂盒。
具有高灵敏度、高特异性、高稳定性
可在同一个管子中高特异性的执行cDNA合成与基于探针的qPCR反应。更多优点如1.卓越的特异性;2.多重反应(高通量);3.反应体系配置,无需冰块;4.无惧高GC含量PCR;5.预防交叉污染;6.广泛的设备兼容性。
| 产品名称 | 方法 | 规格 | 价格 |
| 假结核耶尔森菌LAMP试剂盒 | LAMP | 50次 | 2490元 |
| 假结核耶尔森菌PCR试剂盒 | PCR | 50次 | 1490元 |
| 假结核耶尔森菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 染料法 | 50次 | 2490元 |
| 假结核耶尔森菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | 探针法 | 50次 | 3490元 |
1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增假结核耶尔森菌,与其他微生物没有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
规格及成分
| 成分 | 编号 | 十孔盒包装 |
| PCR MagicMix 3.0 | 试剂一 | 1 mL(红盖) |
| 超纯水 | 试剂二 | 1 mL(亮黄色) |
| 假结核耶尔森菌PCR引物混合液 | 试剂三 | 100 μL(白盖) |
| 假结核耶尔森菌PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) |
试剂四 | 50 μL(黄盖) |
| 核酸释放剂(试用装) | 试剂五 | 20 次(1 mL,绿盖) |
| 使用手册 | 试剂六 | 1 份 |
自备试剂:样品 DNA。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送20 次核酸释放剂试用装,其使用手册可以从本公司网站订购核酸释放剂。
2. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL 补骨脂 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
| 成分 | N+2 个样品管 | PCR 阴性对照 | PCR 阳性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 假结核耶尔森菌PCR引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | -- | -- |
| PCR 阴性对照(水) | -- | 18 μL | -- |
| PCR 阳性对照(假结核耶尔森菌PCR阳性对照的 1000 倍稀释液) |
-- | -- | 18 μL |
- 按下表设置 PCR 反应:
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR 反应(35 个循环) | 95℃ | 15 sec |
| 57℃ | 15 sec | |
| 72℃ | 40 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 10 min |
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染
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。 2022 年 12 月 16 日,西北农林科技大学沈锡辉和福建师范大学欧阳松应联合在 Nature Communications 杂志发表研究论文 A secreted effector with a dual role as a toxin and as a transcriptional factor。 该研究表明假结核耶尔森菌分泌一种效应物 CccR,其为具有毒素和转录因子双重作用的分泌效应子。效应器由 VI 型分泌系统(T6SS)分泌,其通过细胞间接触和接触无关的方式进入附近相同物种
Trichosporon spp 丝孢酵母某些种 Veillonella parvula 小韦荣球菌 Veillonella spp 韦荣氏球菌属某些种 Versinia enterocolitica 小肠结肠炎耶尔森菌 Versinia pseudotuberculosis 假结核耶尔森菌 Vibrio alginolyiicus 解藻朊酸弧菌 Vibrio cholerae 霍乱弧菌 Vibrio fluvialis 弗氏弧菌 Vibrio fluvialis 河流孤菌
带(1)引物用量偏大,引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。(2)循环的次数过多。适当增加模板的量,减少循环次数。(3)酶的用量偏高或酶的质量不好,应降低酶量或调换另一来源的酶。(4)退火温度偏低,退火及延伸时间偏长。应提高退火温度,减少变性与延伸时间,也可采用二种温度的PCR扩增。(5)样品处理不当。(6)Mg2+浓度偏高,因适当调整Mg2+使用浓度。(7)若为PCR试剂盒,也可能时试剂盒本身质量有问题。(五)PCR假阳性结果(1)引物设计不当,应调换引物。(2)循环参数不合适,导致非特异
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