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44
- 英文名:
详见说明书
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
50管/48样
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称:AMP含量测试盒(HPLC)规格
英文名称:详见说明书
产品规格:50管/48样
发货周期:1~3天
发货周期:1~3天
测定意义:
AMP广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定AMP含量并且计算能荷,能够反映能量代谢状态。
测定原理:
AMP在254 nm下有吸收峰,可以利用高效相色谱法测定其含量。
需自备的仪器和用品:
高效相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、针头式过滤器(水系,50个,0.22μm)、滤膜(水系和有机系各1个,0.45μm)、C18柱(4.6 ×150 mm)、可调式移器、样品瓶(50个,2mL)、甲醇(色谱级,300 mL)和蒸馏水。
【培养指南】
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
第一种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
Human T-cell Lymphoma Virus(HTLV)人类嗜T淋巴细胞病毒通用RT-PCR试剂盒VEGF-DSynaptotagmin 5FAM164B蛋白抗体
Human T-cell Lymphoma Virus(HTLV)人类嗜T淋巴细胞病毒通用染料法荧光定量RT-PCR试剂盒VDCC-L alphaphospho-DOK1 (Ser450)FRMD3蛋白抗体
Human T-cell Lymphoma Virus(HTLV)人类嗜T淋巴细胞病毒通用探针法荧光定量RT-PCR试剂盒phospho-AMPK alpha-1/PRKAA1(Thr198) peptide英文名称XTP4酸半乳糖尿苷酸转移酶1抗体
Hyaloma spp.眼蜱通用PCR试剂盒CREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1)英文名称CCBR1糖原蛋白1抗体
Hyaloma spp.眼蜱通用染料法荧光定量PCR试剂盒phospho-CREB-1 英文名称XIAP葡萄糖合成酶2抗体
p60v-src(137-157)规格:>95%,BRADRA2 peptide英文名称XBP1谷草转氨酶2抗体
P1,P5-Di(adenosine-5’-)pentaphosphate,TrilithiumSalt规格:美国进口CRF (Corticotropin-Releasing Factor)英文名称Hepatitis B virus X protein葡萄糖-6酸脱酶抗体
P1,P5-Di(adenosine-5')pentaphosphatepentasodiumsalt规格:美国进口CT (Calcitonin )英文名称Hepatitis B virus X protein葡萄糖转运蛋白5抗体
P1,P5-Di(adenosine-5')pentaphosphatepentaammoniumsalt规格:美国进口CT-R (Calcitonin receptor)英文名称XAB2 葡萄糖合成酶1抗体
p,p’-DDEsolution规格:100μg/ml,u=3%p,p’-DDE规格:分析标准品Ferritin peptide英文名称XDHG蛋白修补结构域蛋白8抗体HPLC≥98%CD134分子检测试剂盒20mgRhoA-GTP
AMP含量测试盒(HPLC)规格Mitochondrial peptide methionine sulfoxide reductase硫酸钾
AMCRA化钾
β1-adrenoceptor antibody酸钾
Carboxylation matrix Gla protein酸钾
25-Dihydroxy vitamin D化铋钾
Retinoic acid receptor reactive protein 2高酸钾
Chromogranin A钾
Semaphorin-4B酸钾
C-C chemokine receptor-like 2高钾
Netrin-4化钾
操作步骤(仅供参考):
1、AMP含量测试盒(HPLC)规格贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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文献和实验通常在整个HPLC系统中,使用.010"ID×1/16"OD的管子是很安全的。使用.010"ID的管子,一般使用的管长度下压降可忽略不计,而且,该内径连接管导致的谱带展宽可以忽略。Upchurch该规格PEEK管颜色为自然色或蓝色(1531和1531B)。 用1.8mmOD的管子取代一些药物系统中使用的含氟聚合物管子。Agilent1100 系统在高压流路中使用新的1/32"OD的管子。PEEK管还有其它尺寸,一般长度为50′和100′。 一个主要的制药
通常在整个HPLC系统中,使用.010"ID×1/16"OD的管子是很安全的。使用.010"ID的管子,一般使用的管长度下压降可忽略不计,而且,该内径连接管导致的谱带展宽可以忽略。Upchurch该规格PEEK管颜色为自然色或蓝色(1531和1531B)。 用1.8mmOD的管子取代一些药物系统中使用的含氟聚合物管子。Agilent1100系统在高压流路中使用新的1/32"OD的管子。PEEK管还有其它尺寸,一般长度为50′和100′。 一个主要的制药
1.色谱柱中的流动相会排干吗? 不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形:不慎未及时补充流动相,泵将溶剂瓶中的流动相吸干了,HPLC系统由此而停止工作了。如此情况是否会损坏色谱柱?泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了?色谱柱还能使用吗?事实上,如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干,并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充满了空气,泵也不会将空气排入色谱柱。因为泵只能输送液体,而不能输送空气。 相比之下,另一个更可能发生的情况是忘记盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干
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