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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
38
- 英文名：
详见说明书
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
10个/包
1. 悬浮细胞，2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎，造成假阳性，过短，细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶消化液，加入细胞培养液终止消化，2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS，洗涤细胞2次（2000rpm x 5min）,收集细胞2～5×105 。
3. 离心弃上清，加入500μL结合缓冲液，轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC，轻轻吹打混匀，加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许，可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。
细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
产品名称：激光共聚焦细胞培养皿35mm-20图片
单位包
英文名称 ConfocalDish(CoverglassBottomDish)Dishsize:35mm，Holesize:20mm，Coverglassthickness:0.175mm
激光共聚焦细胞培养皿
厚度0.175mm
使用进口优质玻片，特别适合激光共聚焦实验
使用进口USPclassVI无细胞毒性的胶水
在无尘车间内生产处理和包装
通过细胞生物学相关实验的质量检测
无热原(<0.5EU/ml)
?射线辐照灭菌
玻底培养皿主要用于要求放大倍数高、培养器皿底面透光性能好的显微实验，如激光
注意事项：
激光共聚焦细胞培养皿35mm-20图片尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
MiddleBrook7Har
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NAC液体培养基 250g 用于绿脓假单胞菌的增菌培养
FB1Broth
FB1(Half-Fraser)添加剂(A、B) 2ml/支*40 每支添加到225ml HBJ006中
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小鼠淋巴管内皮细胞培养试剂盒 小鼠淋巴管内皮细胞培养试剂盒 试剂盒
小鼠脑动脉血管内皮细胞培养试剂盒 小鼠脑动脉血管内皮细胞培养试剂盒 试剂盒
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激光共聚焦细胞培养皿35mm-20图片叙利亚仓鼠皮肤细胞;GH-S1
人角膜细胞RNAHK miRNA5 μg
AKT1 Others Human 人 AKT1 / PKB / PKBα 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
7721细胞，7721肝癌细胞 人肺癌细胞(淋巴结转移),NCI-H292细胞 人间充质干细胞-脂肪
人间充质干细胞-脂肪
PECAM1 Others Human 人 CD31 / PECAM1 人细胞裂解液 (阳性对照)
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
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文献和实验分钟。6. 1×PBS洗3次，每次10分钟。7. 5%BSA室温封闭30分钟。8. 加一抗（用1%BSA稀释）放在湿盒里，4度过夜。9. 1×PBS洗3次，每次10分钟。10. 加二抗(用1%BSA稀释)30分钟，闭光。11. 1×PBS洗3次，每次10分钟。12. 95%甘油封片。注：4%甲醛，0.2%Triton，5%BSA均用1×PBS稀释。 二、细胞爬片的免疫荧光步骤基本一致： 1. 取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意
就可以直接将染料加入培养液中，之后固定观察；但是如果一定要用hoechsts33258，那么就最好是：固定－－>染色－－>观察。 我最近的实验很不顺，我将载玻片用左旋多聚赖氨酸包被后放与六孔板中，但是很容易污染，不知各位高手有何高招。 丁香网友midas认为：载玻片、PLL、六孔板、培养液及玻片确保无菌，最重要的无菌操作技术！ 细胞凋亡的图片1 细胞凋亡的图片2 细胞凋亡的图片3：组织培养中内皮细胞的 apoptosis 细胞凋亡的图片4细胞凋亡的图片5 细胞凋亡的图片6 细胞
并混匀；逐滴加入 100μl2.5MCaCl2，震荡 1min；12000rpm 离心 30s，去上清；加入 200μl 无水乙醇重悬金粉，震荡 30s；12000rpm 离心 30s，去上清；然后加入 100μl 无水乙醇悬浮金粉，可供 10 枪（每枪 10μl）使用，放入-20℃备用。 （4）基因枪 GDS-80 轰击时氦气罐的气压为 1350psi，取 10μl DNA 包裹好的微粒悬浮液加到基因枪中央，进行轰击事先收集好的花粉，之后放置在 25℃避光过夜。 （5）使用激光共聚焦
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