ROS指示剂(羟苯基荧光素)(359010-69-8)(≥9

特别提示：包括ROS指示剂(羟苯基荧光素)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：ROS指示剂(羟苯基荧光素)
英文名称：3"-p-(hydroxyphenyl) fluorescein
产品货号：KM0144
产品规格：1mg

本制品以粉末形式提供，可直接溶于DMF配制成5mM储存液，常用工作浓度范围1-10μM，需根据自身的实验体系或参考文献进行优化。

羟苯基荧光素和氨基běn基荧光素是由T.Nagano开发的两种活性氧指示剂，比H2DCFDA（DCFH-DA,DCFH）具更优秀的特异性和稳定性。羟苯基荧光素和氨基běn基荧光素显示有限的非选择性反应，和相对较高的光诱导氧化抗性。羟苯基荧光素和氨基běn基荧光素具细胞膜渗透性，本身无荧光，直到与羟基自由基或过氧亚硝基阴离子反应，还能与次氯酸阴离子反应，产生强绿色荧光（Ex/Em，~490/515nm），可用荧光显微镜、高通量成像仪、荧光酶标板或流式细胞仪检测。

主要参数：
CAS NO.：359010-69-8
分子式：C26H16O6
分子量：424.4
纯度：≥95%
Ex/Em：492/515nm
溶解性：溶于DMSO（10mM）、DMF（5mM）
结构式：

保存：-20oC避光干燥保存，至少一年有效。

注意事项：
1．羟苯基荧光素仅用于科研研究，不可用于体外诊断研究。
2．羟苯基荧光素产生的荧光相对于其他活性氧探针比如DCFH弱很多，这是探针本身的特性决定的（。
3．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法：

一、储存液制备
将低温保存的1mg粉末置于室温回温至少20min，之后加入471μl无水DMF配置成5mM储存液。充分溶解和混匀后，按照单次用量分装，-20oC避光干燥保存，避免反复冻融。
  注：羟苯基荧光素能溶于DMSO（10mM），但有数据显示DMSO是羟基自由基的淬灭剂，会干扰检测和降低灵敏性。因此，建议用DMF作为溶剂。

二、溶液体系检测
正式实验前，取一管羟苯基荧光素储存液置于室温回温，使其充分融解。之后用合适的缓冲液（比如HHBS缓冲液，PBS缓冲液）稀释到所需的工作浓度。建议起始浓度为1-10μM，需根据自身的实验体系或参考文献进行优化。

三、细胞体系检测
以下实验步骤仅做参考，zuì佳的工作浓度、孵育时间和温度需根据实际情况进行调整。在加入羟苯基荧光素工作液之前按需处理细胞。

1．根据具体用量，将DMF储存液用HHBS缓冲液或其他生理缓冲液稀释成1-10μM工作液。
2．根据实验设计处理细胞（比如，RASM细胞用50-100nM血管紧张素II处理3-5h）。
3．取步骤1准备的1-10μM工作液加入细胞，37oC孵育20-60min。
4．吸掉染色工作液，用HHBS或其他生理缓冲液替换。
5．用合适的荧光仪器（Ex/Em=492/515nm）来检测。
  注1：BSA和酚红会影响荧光，需谨慎使用。
  注2：羟苯基荧光素能用于溶液体系或胞内ROS检测。

附表1活性氧探针对各种活性氧物质的反应特异性

ROS	ROS产生方法	羟苯基荧光素 (KM0144)	氨基běn基荧光素 (KM0143)	DCFH (KM0062)
HO?	100μM高lǜ酸亚铁(II)+1 mMH2O2	730	1200	7400
ONOO–	3μM(终浓度)ONOO–	120	560	6600
OCl-	3μM(终浓度)OCl-	6	3600	86
1O2	100μM3-(1,4-dihydro-1,4-epidioxy-1-naphthyl)propionic acid	5	9	26
?O2–	100μMKO2	8	6	67
H2O2	100μMof H2O2	2	＜1	190
NO	100μMNOC-7	6	＜1	150
ROO?	100μMAAPH	17	2	710
Autoxidation?	荧光光照2.5h	＜1	＜1	2000

我公司销售的ROS指示剂(羟苯基荧光素)(359010-69-8)(≥95%)，活性氧指示剂质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。