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高保真组装克隆:Hipro DNA Assembly Clo

ning Kit(K001)
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  • 英赞(EnzyValley)
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  • K001
  • 2025年12月31日
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      2年

    • 英文名

      Hipro DNA Assembly Cloning Kit

    • 库存

      充足

    • 供应商

      广州英赞生物科技有限公司

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    高保真同源重组试剂盒

    产品概述

    Hipro DNA组装克隆试剂盒可以高效、准确的组装DNA片段,从而实现简单快速的无缝克隆。该产品可以在一管内,恒温条件下,有效的连接多个带有重叠序列的片段,广泛应用于基因的快速定向克隆,实验过程涉及的反应机理如下:
    (1) 利用外切酶活性产生单链3‘ 突出端,促使互补的末端重叠序列(15-20 bp)退火;
    (2) 互补末端一旦退火完成,聚合酶活性会沿3‘延伸填补退火片段的缺口;
    (3) 缺口补平后,利用DNA连接酶的连接酶活性完成DNA切刻处的修复,形成完整的重组载体。
    整个过程只需在50℃下反应5-15 min即可完成,一次反应可兼容1~5个片段的同源重组,内含高保真DNA聚合酶和高保真DNA连接酶可确保重组准确进行,连接产物可进行多种化学感受态大肠杆菌的转化,阳性率接近100%。


    产品内容

    组分 K001A/25rxn                                 K001B/50rxn                          
    Hipro DNA Assembly Mix 125μL         250 μL   

     
    产品优势
    快速:5 ~15min即可完成连接反应。
    兼容性强:可完成1~5片段的同源重组。
    方便快捷:2×预混液包装,减少加样次数,使得克隆更为高效。

    实验案例
    1.  单片段同源重组

    产品细节图片4
    以线性化的pDA-Zero vector、与2× PfuMax HiFi PCR ProMix(英赞,P217)扩增所得0.5kb DNA片段作为同源重组的底物,用Hipro DNA Assembly Mix进行50℃,5min快速同源重组后,转化到DH5α感受态细胞,培养12-16 h后,平板菌落生长状况如图1所示,随机挑取30颗单克隆用载体通用引物进行菌落PCR,后进行琼脂糖凝胶检测,如图4所示,分析上述结果可得,Hipro DNA Assembly Mix具有优异的重组效率和阳性率。


    2.  多片段同源重组

    产品细节图片5

     

    以线性化的pET-28a载体、与2× PfuMax HiFi PCR ProMix(英赞,P217)扩增所得0.5 kb 、1.0 kb、2.0 kb DNA片段作为同源重组的底物,用Hipro DNA Assembly Mix进行50℃,15min快速同源重组后,转化到DH5α感受态细胞,培养12-16 h后,平板菌落生长状况如图3所示,随机挑取28颗单克隆用载体通用引物进行菌落PCR,后进行琼脂糖凝胶检测,如图4所示,分析上述结果可得,Hipro DNA Assembly Mix具有优异的重组效率和阳性率。

     
    应用范围
    单片段同源重组,多片段同源重组,快速克隆



     

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