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qRT-PCR专用逆转录预混液:PreScript III

RT ProMix for qPCR
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  • R420A/B
  • 2026年01月03日
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    • 英文名

      PreScript III RT ProMix for qPCR

    • 库存

      充足

    • 供应商

      广州英赞生物科技有限公司


    更高效的qRT-PCR专用预混液

    产品概述
    本产品基于PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase,包含合成高质量cDNA所需的所有成分,适合于两步法RT-qPCR检测。通过定点突变得到的PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase是RNase H活性缺失的全新逆转录酶,酶的热稳定性和cDNA合成效率得到大幅提升。2× RT Reaction Mix包含优化的缓冲体系、Oligo (dT)23VN、Random hexamers和dNTPs,PreScript Ⅲ Enzyme Mix包含PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase和RNase Inhibitor。此外,产品针对qPCR进行特别优化,可以在15 min内短时高效地合成qPCR所用的模板cDNA。
     
    产品内容
    组分 R420A/ 50rxn R420B/ 100rxn
    2× RT Reaction Mix 500 μL 1 mL
    PreScript Ⅲ Enzyme Mix 100 μL  200μL 
    RNase-free ddH2O 1 mL 1 mL

     

    产品优势
    高度的热稳定性:全新的逆转录酶PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase具有更好的热稳定性
    对复杂模板具有良好的延伸性能:在50℃条件下反转录反应也可以使具有复杂结构的RNA进行良好的延伸
    模板兼容性高:兼容不同物种及完整度较差的Total RNA
    短时高效的进行逆转录:优化比例的Random primers/Oligo (dT)23VN primer mix,可以在15 min内短时高效地合成qPCR所用的模板cDNA

    实验案例
    1.  优异的cDNA合成效率
     
    产品细节图片1
     
     
    在10 μL反应体系中分别添加HeLa细胞来源的Total RNA 0.5 μg~0.5 pg,分别进行逆转录反应。然后,在Realtime PCR反应液(使用本公司S018产品)中分别添加上述的逆转录反应液各1% (V/V),用Realtime PCR对ACTB和B2M的cDNA量进行定量,然后进行cDNA合成量的比较。结果可见,在探讨的范围内,模板RNA的量和cDNA的得率密切相关,但无论模板RNA量的多寡,仍可维持很高的cDNA合成效率。可见在目的片段浓度有差异的样品之间,逆转录反应效率的变化并不大,因此可将定量结果的误差控制在最小范围内。

    2.  与其他公司逆转录性能的比较
     
    产品细节图片2
     
    以梯度稀释的HeLa细胞Total RNA为模板,在说明书提供的反应体系及反应条件下进行逆转录,然后用Realtime PCR 进行检测。结果表明,与A公司同类产品相比,PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase产品具有更高的逆转录性能。

    3.  对不同模板的逆转录能力
     
    产品细节图片3
     
    以HeLa细胞Total RNA为模板,挑选高、中、低三种表达量的基因,在说明书提供的反应体系及反应条件下进行逆转录,然后用Realtime PCR检测多对基因,结果表明,对不同表达量的基因,本产品都具有优异的逆转录能力。
     
    应用范围
    合成用于qPCR的cDNA模板,高质量 cDNA合成;全长cDNA文库的构建等。

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    • 逆转录qPCR 实验还出错?这几点你可能没注意!

      大家一臂之力,里面包含单独成管的 Oligo (dT)20VN 及 Random hexamers,可以根据模板类型和后续实验需求灵活选择或按比例混和;还有 HiScript® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)(R323),包含逆转录反应所需的所有组分,当然 Random primers 和 Oligo (dT)20VN 的混合引物也直接在这管 SuperMix 中,只需加入模板 RNA,20 min 内即可完成逆转录反应,极为方便! 第三个选择就是基因

    • 教您正确选择逆转录酶,适用 6 种不同应用

      的动态范围或线性度最佳,可确保基因表达定量的准确性。 所选试剂在扩增过程中应产生较高且一致的 cDNA 得率,以获得具有高灵敏度和低变异性的基因表达结果。可考虑预混形式的逆转录酶用以可以减少实验误差。 RT-qPCR 的一个特殊程序是从未经 RNA 分离的粗细胞裂解物直接进行逆转录。在使用稀缺样本或选用群体内特定细胞的实验,可考虑使用直接 RT-qPCR 法来防止可能的样本损失和低 RNA 回收。 cDNA 克隆和文库构建 cDNA 文库可由代表特定样本中转录序列的 cDNA 克隆组成

    • 专家解惑:如何开展单细胞qPCR分析(二)

      份,单独分析和比较,以检验裂解。利用CelluLyser,我们发现各等份之间的一致性很好,说明细胞均匀地裂解。利用加热或蒸馏水来裂解细胞通常产生异质的裂解液,导致各等份不均一。通过RNA加标可检测回收效率和重复性。我们设计了一个带有5’帽子和A尾巴的通用加标,以模拟天然的mRNA。RNA加标可添加到裂解液中,或显微注射到细胞中。逆转录也应当优化。因引物结合、目的基因和逆转录酶的不同,RT产量可相差200倍之多。此外,添加到RT预混中的裂解液的量也必须仔细调整,以避免抑制,同时让RT产量最高。预扩

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