2×Long PCR Master Mix(含染料)

特别提示：包括2×Long PCR Master Mix(含染料)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：2×Long PCR Master Mix(含染料)
英文名称：2×Long PCR Master Mix (With Dye)
产品货号：SY0031
产品规格：1ml

Long PCR Master Mix (With Dye)包含Long Taq DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化实验的操作步骤，提高了高通量操作和实验结果的重现性。Long Taq DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase与一种含有3’→5’外切酶活性（校对活性）的蛋白组成的混合酶，保真度是Taq DNA Polymerase的6倍。配合独特的缓冲体系，Long Taq DNA Polymerase可从人基因组模板中扩增长达15 kb的片段。

Mix中含有电泳缓冲液和溴酚蓝染料，可在反应结束后直接进行电泳，使用方便。其中的保护剂使得Mix 经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。PCR产物的3’端带A，可轻松克隆至T载体。

质量控制
核酸外切酶残留检测：20μl本品和0.6μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：20μl本品和0.6μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50μl体系中，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测：50μl体系中，以100ng人基因组DNA为模板扩增dystrophin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15Kb条带。

除了2×Long PCR Master Mix(含染料),，我公司还供应以下相关产品：



名称：一步式RT-PCR Mix
货号：BTN130609
规格：1mL
本产品是基于Tth DNA聚合酶的单酶一管式RT-PCR试剂盒。Tth DNA聚合酶通过其逆转录酶活性合成cDNA，再通过其DNA聚合酶活性进行PCR扩增。它跟常规MMLV和AMV的最大区别是逆转录过程可以在高温进行，能有效打开RNA的二级结构，其示意图如下：

同时操作简单一步完成，其操作流程图如下：


产品特点：
1.中途添加试剂，省去反复打开和关闭反应管盖的麻烦，便于同时处理多个检测样品。
2.样品之间的交叉感染和纵向感染的危险性比较低，可以避免假阳性。
3. 改良了酶的品质，实现了优良的检测敏感度。
4. 即开即用，非常方便。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

名称：2×即用型PCR预混溶液(热启动高保真)
货号：SY0039
规格：1ml
包含HotStart Pfu DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化实验的操作步骤，提高了高通量操作和实验结果的重现性。体系中含有的保护剂使得Master Mix 经过反复冻融后仍可维持稳定的活性。PCR产物为平末端。

质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测1：以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的8.2 kb条带。
功能检测2：以10 ng λDNA为模板扩增30个循环，取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15 kb条带。

储存条件：-20℃。

名称：Phi29 DNA聚合酶
货号：JN0020
规格：125U
  本酶是从Bacillus subtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶，利用基因重组技术，在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。Phi29 DNA聚合酶具有高效的DNA合成能力，可连续合成多达70kb的DNA片段。同时该酶具有3′→5′外切酶校读功能，保真性高，还具有特殊的链置换和连续合成特性。

产品组成：

组份	JN0020-125U
phi29 DNA 聚合酶	125U
dNTP混合液（各10mM）	200μl
10×phi29 Buffer	1ml

产品特点：
1、极高的掺入率。
2、超强的链置换能力。
3、保真性高。
4、中温下反应。

产品用途：
1、恒温protein-primed DNA扩增。
2、利用随机引物扩增DNA。
3、滚环复制。
4、复制extended-region。

注意事项：
1、该酶缓冲液中含有还原剂DTT以便保证其最大酶活性。故如果缓冲液不新鲜或经过反复冻融，使用前应添加4mM的DTT。
2、要求高扩增效率的反应，请选择百奥莱博蛋白质工程改造的升级版super phi29 DNA 聚合酶（JN0019）。

应用：菌液测序模板制备
优点：无需细菌培养、收集、裂解和质粒DNA的分离与纯化，不需要离心机和PCR仪。
样品预变性：挑取单克隆，参考右侧反应体系热变性。
质粒扩增：按下面反应条件进行，如选用百奥莱博super phi29 DNA 聚合酶（JN0019）反应时间可缩短到1小时*
热失活：65℃，10分钟。
测序反应：取上述反应液2μl加8μl双蒸水，即可用于直接测序。

常用反应体系（50μl）

10×phi29 Buffer	5μl
随机引物（1mM）	1.25μl
质粒模板（1μg/ml)	1μl
加ddH2O至45μl,95℃预变性3min,冰上冷却。
dNTP(各10mM)	2.5μl
100x BSA	0.5μl
phi29 DNA Pol	2.5μl
30℃	过夜

质量保证：经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。

活性定义：在30℃条件下，10min内能使0.5 pmol的dNTP掺入酸不溶性物所需要的酶量定义为1个活性单位。

10×反应缓冲液：500mM Tris-HCl（pH 7.5）, 100mM MgCl2，100mM (NH4)2SO4，40mM DTT。反应时需要加入dNTP。

储存条件：-20℃