- 询价
- 实验技术服务
- 全国
- 2026年04月20日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
威斯腾生物
- 服务名称：
慢病毒构建、包装、扩增、纯化、鉴定
制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒，四种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染293T细胞，转染后8 h 更换为完全培养基，培养48h后，收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，对其浓缩后得到高滴度的慢病毒浓缩液,感染Hela细胞后定量PCR检测病毒滴度。体内和体外实验对慢病毒滴度的要求不同，生产过程中可以通过浓缩得到不同滴度的慢病毒颗粒。
二、 实验材料
1、慢病毒载体、包装细胞和菌株慢病毒载体系统（Tronolab）：
该病毒包装系统为四质粒系统，组成为pRsv-REV， pMDlg-pRRE，pMD2G, 目的干扰质粒。其中目的干扰质粒能表达绿色荧光蛋白（GFP）. pRsv-REV， pMDlg-pRRE，pMD2G含有病毒包装所必须的元件.
细胞株 293T，慢病毒的包装细胞，为贴壁依赖型成上皮样细胞，生长培养基为DMEM(含10% FBS)。贴壁细胞经培养生长增殖形成单层细胞。菌株 大肠杆菌菌株DH5α。用于扩增慢病毒载体和辅助包装载体质粒。
2、主要试剂
| 试剂名称 | 生产厂家 | 货号 |
| 包装细胞293T细胞株 | 中科院上海细胞所 | |
| 大肠杆菌菌株DH5α | Invitrogen公司 | |
| 胎牛血清 | Invitrogen公司 | |
| 胰蛋白酶 | Invitrogen公司 | |
| 限制性内切酶 | Fermentas | |
| T4 DNA连接酶 | NEB公司 | M0202V |
| 质粒DNA提取试剂盒 | Axygen公司 | |
| 制备感受态试剂盒 | BIOSCIENCES | |
| 凝胶回收试剂盒 | Qiagen公司 | |
| 1kb/100bp ladder | Fermentas |
3、主要仪器
| 仪器名称 | 生产厂家 | 货号 |
| PCR仪 | Applied Biosystems公司 | |
| 电泳仪 | Bio-rad公司 | |
| 荧光倒置显微镜 | 奥林帕斯 | |
| 冷冻超速离心机 | Hitachi | |
| 细胞培养箱 | healforce | |
| 凝胶成像仪稳压DNA电泳仪 | Tianneng | |
| 恒温摇床 | ||
| 电热恒温培养箱 | ||
| 移液器 | eppendorf | |
| 电热恒温水浴锅 | 上海一恒实验设备有限公司 | |
| 数码凝胶处理系统 | 天能科学仪器 | |
| 一次性平皿 | Cell-star | |
| 烧瓶 |
三、慢病毒载体系统质粒基本信息和图谱
该病毒包装系统为四质粒系统，组成为pRsv-REV， pMDlg-pRRE，pMD2G, 目的穿梭质粒。其中穿梭质粒（目的穿梭质粒）含有能表达绿色荧光蛋白（GFP）；pRsv-REV， pMDlg-pRRE，pMD2G含有病毒包装所必须的元件。
四、 慢病毒生产实验步骤
1、慢病毒包装细胞转染用胰蛋白酶消化对数生长期的293 T细胞，细胞密度为0.5×10时；重新接种于25 mL的15cm细胞培养皿，37℃，50 mL/L CO2培养箱内培养；
2、制备慢病毒包装系统中四种质粒DNA溶液；
pRsv-REV 10 μg，
pMDlg-pRRE 15 μg，
pMD2G 7.5 μg,
干扰质粒 20 ug
加入无菌水定容至1800 μL, 再加入CaCl2 (2.5 mol/L) 溶液200 μL，混匀，加入2×BBS缓冲盐溶液2000 μL，室温放置20～30 min；
3、当细胞密度达60%～70%时转染. 将DNA和磷酸钙混合液转移至含单层细胞的培养液中，混匀，培养12 h后弃去含有转染混和物的培养液，加入PBS 15 mL，轻摇后弃去，重复该步骤3次.；
4、每瓶细胞中加入含100 mL/L小牛血清的细胞培养液15 mL，继续培养48 h.；
5、收集转染72 h的293T细胞上清液；
6、将收集的上清液于4℃，4000 g离心10 min，收集上清液；
7、将各种不同RNA干扰质粒上清液以0.45 μm滤器过滤；
8、于40 mL超速离心管中，4℃，25000 r/min离心20 min；
9、而后以冰PBS液，分别溶于500ul Dmem,和500ul PBS重旋病毒沉淀于4℃溶解过夜
（威斯腾生物--原代培养、细胞敲除、模式动物一站式科研服务！）
实验服务流程
威斯腾生物服务项目
| 分子生物学类 | 蛋白质与免疫学 | 动物实验 |
| 实时荧光定量PCR | 单克隆抗体制备 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗体制备 | 抑郁症动物模型 |
| ELISA（酶联免疫吸附法）技术 | Western-blot 实验服务 | 脊髓损伤模型 |
| 生化指标检测 | 蛋白双向电泳实验服务 | 脑外损伤模型 |
| 双荧光素酶报告基因检测 | 原核蛋白表达纯化 | 骨神经损伤模型 |
| 染色质免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表达纯化 | 心肌缺血模型 |
| GST pull Down | ITRAQ定量蛋白质组学 | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白组学 | 肺动脉高血压动物模型 | |
| 高血压模型 | ||
| 病毒类 | 实验课题整体外包 | 粥样动脉硬化模型 |
| 过表达/干扰慢病毒包装纯化 | 整体课题外包 | 大脑中动脉阻塞模型 |
| 过表达/干扰腺病毒包装纯化 | 细胞整体实验外包 | 慢性之气管炎模型 |
| 逆转录病毒包装纯化 | 动物整体实验外包 | 过敏性哮喘模型 |
| 腺相关病毒包装纯化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代细胞培养 | 肝纤维化模型 |
| 细胞因子芯片 | 骨髓间充质干细胞培养 | 胆结石模型 |
| 生长因子芯片 | 脂肪干细胞培养 | 急性胰腺炎模型 |
| 信号通路磷酸化水平检测芯片 | 心肌成纤维细胞培养 | 急性肾衰竭模型 |
| BioPlex悬浮芯片 | 软骨细胞培养 | 体内血栓模型 |
| 生长因子芯片 | 血管内皮细胞培养 | 关节炎模型 |
| 炎症因子芯片 | 神经元细胞培养 | I型和II型糖尿病模型 |
| 血管生成因子芯片 | 内皮组细胞原代培养 | 裸鼠成瘤 |
| 凋亡因子芯片 | 基因编辑动物 | |
| 趋化因子芯片 | 电生理相关服务 | 动物整体实验服务 |
| HuProt TM 20K人类蛋白组芯片 | 膜片钳实验 | |
| 细胞生物学 | 高通量测序 | 代谢组学 |
| 细胞原代培养 | mRNA测序 | 气相色谱GC/MS |
| MTT检测 | LncRNA测序 | 液相色谱LC/MS |
| 细胞凋亡检测 | 全基因组测序 | 核磁共震NMR |
| 细胞周期检测 | RNA-Seq测序 | |
| 细胞克隆形成实验 | 外显子测序 | 影像学相关实验 |
| Transwell细胞迁移/侵袭 | 16s扩增子测序 | Micro-CT |
| 流式分选 | Small RNA测序 | 小动物活体成像 |
| CCK8/XTT检测 | 宏基因组测序 | 核磁共振 |
| 台盼蓝检测细胞活性 | 单细胞测序 | PET-CT |
| 药物筛选细胞学实验 | circleRNA测序 | |
| 细胞粘附性检测 | 甲基化测序 | 基因编辑动物 |
| 细胞划痕实验 | 条件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞生物学整体实验 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞成管实验 | ||
| 病理类 | CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 扫描电镜 | 基因定点突变细胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射电镜 | 单基因敲除细胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除细胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫组化 | 目的基因敲入细胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠来源样本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）检测 | 报告基因敲入细胞系 | SNP芯片（限人和小鼠来源样本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除细胞系 | |
| 免疫荧光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9动物敲除/敲入 | 科研方案设计与SCI相关服务 |
| 原位杂交 | 基因敲除大鼠/小鼠 | 科研文献论著翻译 |
| 荧光原位杂交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | SCI论文翻译润色服务 |
| 特殊染色（PSA、茜素红、阿尔新蓝等） | 临床实验/科研实验设计方案指导 | |
| 行为学检测 | 药物筛选服务项目 | 药效学评价 |
| 水迷宫实验 | 高通量自动药物筛选平台 | 神经系统药物药效学评价 |
| 旷场实验 | 细胞高内涵药物筛选平台 | 抗肿瘤药物药效学评价 |
| 重复性刻板行为检测 | 蛋白质组学靶标研发平台 | 心血管系统药物药效学评价 |
| 动物跑台检测 | 分子药理研究平台 | 泌尿系统药物药效学评价 |
| 强迫游泳 | 生物膜片钳药物筛选平台 | 内分泌系统药物药效学评价 |
| 常规药物体外筛选 | 抗炎免疫药物药效学评价 |
分子生物学、细胞生物学、基因敲出/入、模式动物、SPF动物保种、病理学检测、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验，经过不断的研发和升级，也推出了数据库的全面升级，数据库的升级将大大提升精准分析的准确度，也为助力 GC-MS/LC-MS 双平台代谢组学研究。 代谢组看点双平台代谢组学： （LC-MS 和 GC-MS）双平台代谢组学，通过优化前处理方法并结合 GC-MS 平台和 LC-MS 平台各自优势，同时配套多年积累的拥有自主产权的自建数据库，实现一份样本双平台检测，双数据库定性极大地提高代谢物鉴定的数量和准确性。
GC-MS 代谢组全套技术流程、应用瓶颈、定量方式及数据库应用
以及 sub class 分类统计 鉴定到代谢物在 lipidmaps 数据库中 class 及 sub class 分类统计 9.GC-MS 代谢组研究经验 鹿明生物建立起了空间代谢组学、全谱代谢组、靶向代谢组、拟靶向代谢组、脂质组、精准靶向等代谢组学技术平台。 其中基于 GC-MS 平台，鹿明生物已经开发建立了含保留时间（保留指数），MS 二维鉴定的自建代谢组气质数据库-LUG4.0，原有的基础上补充至 1500 个，总库容量增加至 3000 个（已全部上机，并已获取到标准
创刊 3.代谢组学的应用与发展 3.1 代谢组学促进多学科，多领域交叉发展 代谢组学的不断发展，促使分子分离和检测仪器，结构解析的制造商以及相关科学家们需要不断地研发出各种针对代谢组学的硬件、软件和技术支持。也就意味着需要不同领域和学科的技术支持，特别是基于分析化学的结构解析方面。同时，在代谢组学的发展中至关重要的是基于计算机科学（程序语言）的大数据处理和分析。因此，代谢组学的发展离不开多科学、多领域的技术发展。 3.2 代谢组学在医学领域中的应用 新药的筛选和开发：新药研发存在风险高
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
