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文献和实验-DNA液,加入6ml DMEM完全培养基,37℃孵育过夜,再换液。 7 培养过程中观察细胞生长情况。约2周后可观察到细胞病变(CPE)出现(如用pAdTrack-CMV质粒,由于含GFP,可观察到绿色荧光)。 四 重组病毒鉴定 1 转导10-14d后,收集细胞沉淀,加入2ml灭菌的PBS混悬,冻融细胞,离心后收集上清保存于-80℃。 2 取30-50% 步骤1中上清,感染50-70%饱和度的25cm2 方瓶中293细胞。2-3d后出现明显细胞
改性处理后,可以让细胞更好的进行贴壁培养,这样根据细胞贴壁面积又可以分为25~175cm2多种。 国产的 细胞培养 瓶一般盖子都是封闭的,不带内垫,常用于密闭培养,可保证其密闭性;进口的培养瓶的盖子样式比较多:密闭盖、聚酯盖、透气盖、隔垫盖等。密闭盖的性能和国产的是相同的,聚酯盖常用于开放培养,只需轻轻旋松瓶盖便可保证瓶内气体与环境中气体的交换。透气盖是在瓶盖中加了0.2μm疏水滤膜,提供无菌气体交换,减少污染的风险。常用于开放培养,推荐用于CO2
,polystyrene (PS)为透明材质,可依实验需要而选择适合材质之离心管。1.5. glass pastuer pipet:9 inch,用以抽掉废弃培养液等。1.6. 玻璃血清瓶(Pyrex or Duran glassware):100 ml,250 ml,500 ml,1000 ml。2. 清洗2.1. 新购玻璃血清瓶先以0.1~0.05N HCl浸泡数小时,洗净后才开始使用。2.2. 用过之玻璃血清瓶,以高压蒸汽灭菌,洗净后分别用一次与二次去离子水冲洗干净,勿加清洁剂清洗。3. 灭菌3.1. 实验
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