25cm²培养瓶，PS，40ml,透气盖，TC处理，灭菌

重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作

-DNA液，加入6ml DMEM完全培养基，37℃孵育过夜，再换液。 7  培养过程中观察细胞生长情况。约2周后可观察到细胞病变（CPE）出现（如用pAdTrack-CMV质粒，由于含GFP，可观察到绿色荧光）。 四 重组病毒鉴定 1  转导10-14d后，收集细胞沉淀，加入2ml灭菌的PBS混悬，冻融细胞，离心后收集上清保存于-80℃。 2  取30-50% 步骤1中上清，感染50-70%饱和度的25cm2 方瓶中293细胞。2-3d后出现明显细胞

成纤维细胞的培养和形态

丁香园网友hyong915的观点为：成纤维细胞培养（一） 原代培养1、在手术室无菌条件下，切取新鲜的皮肤，增殖性瘢痕和瘢痕疙瘩组织，修除表皮和皮下组织，盐水反复冲洗后放入含PS的DMEM培养液内带回无菌工作间。2、把组织块置于培养皿内，Hank,s液漂洗三遍后吸净Hank,s液，眼科剪反复剪切组织块成0.5－1mm3大小。用弯头吸管吸取组织块接种于40ml培养方瓶瓶壁上，组织块间留约0.3－0.5cm的间距。3、 塞好瓶塞，放入37℃电热恒温培养箱内3.5小时使培养的组织小块微干涸

细胞培养注意事项（入门级）

达到70－80%就可以传代。早点传代也可以。如果是贴壁生长的细胞：1） 培养皿/瓶用枪头或移液管吸去原培养液；2） 无菌PBS或无菌生理盐水洗涤3次（按培养体积加入）；3） 加入适量胰酶消化适当时间（一般胰酶为0.25%；9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶，一次加入1mL胰酶。消化时间视细胞类型等多种情况综合考虑，一般如果是细胞株，非原代培养，消化1－2分钟足矣）；4） 用枪头吹打数十次（视细胞类型而定。一般细胞株30－50次吧，耗时一般2分钟左右）；5） 加入适量体积完全培养基终止